【摘 要】
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目的观察瞬时受体电位M7通道（transient receptor potential melastatin 7,TRPM7）低表达对癫痫（epilepsy,EP）神经元的细胞活力、凋亡阳性细胞百分比、凋亡相关蛋白和自噬相关蛋白表达以及锌含量的影响,探讨TRPM7在EP细胞自噬和凋亡中的作用机制。方法小鼠脑神经瘤细胞（mouse neuroblastoma N2a cells,Neuro-2a）经
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目的观察瞬时受体电位M7通道（transient receptor potential melastatin 7,TRPM7）低表达对癫痫（epilepsy,EP）神经元的细胞活力、凋亡阳性细胞百分比、凋亡相关蛋白和自噬相关蛋白表达以及锌含量的影响,探讨TRPM7在EP细胞自噬和凋亡中的作用机制。方法小鼠脑神经瘤细胞（mouse neuroblastoma N2a cells,Neuro-2a）经无镁细胞外液培养3 h建立EP细胞模型。利用脂质体转染TRPM7 si RNA,使Neuro-2a细胞低表达TRPM7。实验分4组:对照组（Control）、EP组（EP）、癫痫转染组（EP+si-TRPM7）、癫痫转染阴性对照组（EP+si-NC）。利用免疫荧光、Western Blot和实时荧光定量PCR技术检测TRPM7的表达;利用细胞计数试剂盒-8（Cell Counting Kit-8,CCK-8）检测细胞活力;利用原位末端标记法（Td T-mediated d UTP Nick-End Labeling,TUNEL）和Western Blot检测TUNEL阳性细胞百分比、凋亡相关蛋白caspase-3、bax和bcl-2的表达;利用免疫荧光技术和Western Blot检测自噬相关蛋白beclin-1、LC3B、LC3AⅡ/LC3AⅠ和p AMPK/AMPK的表达;利用对甲苯磺胺酰染色（N-（6-methoxy-8-quinolyl）-pToluenesulfonamide,TSQ）检测TRPM7低表达对细胞内锌分布的影响。结果与Control组相比,EP组细胞的TRPM7 m RNA和TRPM7蛋白表达均明显增多;细胞活力降低;TUNEL阳性细胞百分比明显增加;促凋亡蛋白caspase-3和bax表达增多,抑凋亡蛋白bcl-2的表达减少,bcl-2/bax减小;自噬相关蛋白beclin-1和LC3B蛋白表达增多,LC3AⅡ/LC3AⅠ和p AMPK/AMPK增大。锌离子含量增加。与EP+si-NC组相比,EP+si-TRPM7组细胞的TRPM7 m RNA和TRPM7蛋白表达明显减少;细胞活力增强;TUNEL阳性细胞百分比明显减少;caspase-3和bax表达减少,bcl-2表达增多,bcl-2/bax增大;beclin-1和LC3B蛋白表达减少,LC3AⅡ/LC3AⅠ和p AMPK/AMPK减小;锌离子含量减少。结论TRPM7低表达能提高细胞活力、抑制神经元凋亡和自噬、减少锌向细胞内流。TRPM7低表达对EP神经元的保护作用可能是通过减少细胞内锌、抑制了细胞自噬而实现的。
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