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背景与目的:AFP阴性肝癌（ANHC）的诊断仍是临床重要问题,寻找有效的ANHC诊断标志物具有重要意义。适配子是通过指数富集的配体系统进化（SELEX）技术,从人工合成的随机单链寡核苷酸文库中筛选获得能特异性结合生物靶标的寡核苷酸序列,在肿瘤诊疗中有良好应用前景。在前期工作中,本课题组筛选出了一批ANHC血清适配子,并通过适配子血清蛋白组学捕获到一批ANHC血清候选标志物。在这项研究中,我们使用酶联免疫吸附检测（ELISA）测定了八个候选标志物的血清水平,并评估了它们对ANHC的诊断价值。以期发现有价值的新的ANHC血清标志物。方法:1.收集研究对象及其血清标本:收集2020年9月～2022年12月南昌大学第一附属医院住院治疗的肝癌、肝硬化、慢性肝炎及胃癌患者以及体检正常的正常人血清标本,并收集有关临床资料,包括一般信息、病史、实验室检查、影像学检查、病理检查及其它有关资料。2.测定ANHC候选标志物的血清水平:采用商用ELISA试剂盒检测8种候选血清标志物在ANHC、AFP阳性肝癌（APHC）、肝硬化（LC）、慢性肝炎（CH）、胃癌（GC）患者以及正常对照的血清水平。8种候选血清标志物为富含亮氨酸α2糖蛋白1（LRG1）、血清淀粉样A1蛋白（SAA1）、血清淀粉样A2蛋白（SAA2）、补体C4b结合蛋白α链（C4BPA）、结合珠蛋白（HPT）、结合珠蛋白相关蛋白（HPR）、α1-酸性糖蛋白（A1AGP）和肝素辅因子2（HC Ⅱ）。同步测定异常凝血酶原（DCP）的血清水平作对比研究。3.评价ANHC候选标志物单独和联合的诊断价值:采用受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）评价候选血清标志物单独或联合鉴别ANHC与对照的价值。通过二元Logistic回归分析建模实现候选标志物联合分析。根据ROC曲线分析确定最佳阳性界值,计算各候选标志物的诊断效率（敏感度、特异度、准确度、阳性和阴性预测值、阳性和阴性似然比）。4.评价候选血清标志物鉴别ANHC与良性肝病的价值:以ANHC为病例组,良性肝病（慢性肝炎+肝硬化）为对照组,评价各候选标志物鉴别ANHC与良性肝病的价值,并计算诊断效率。结果:1.候选标志物的血清水平及其诊断价值:本研究共检测221～617例血清标本的8种候选标志物水平,结果如下:A1AGP:共测量52例ANHC和292例对照的A1AGP血清浓度,ANHC的血清A1AGP水平低于对照组,其中与肝硬化、慢性肝炎和正常对照组间差异具有统计学意义（P＜0.001）,在鉴别ANHC与肝硬化、慢性肝炎和正常对照有中等价值（AUC为0.735-0.778）,且优于DCP。SAA2:共测量50例ANHC和306例对照的SAA2浓度,ANHC的血清SAA2水平高于对照组,其中与全部对照、肝硬化、慢性肝炎和正常对照组间差异有统计学意义（P＜0.001）,在鉴别ANHC与全部对照、肝硬化、慢性肝炎以及正常对照组具有中等至良好价值（AUC为0.760-0.845）,优于或与DCP相当。C4BPA:共测量55例ANHC和448例对照的C4BPA浓度,ANHC的血清C4BPA水平高于对照组,其中与肝硬化和正常对照组组间差异具有统计学意义（P＜0.001）,在鉴别ANHC与肝硬化以及正常对照组具有中等和良好价值（AUC分别为0.710、0.855）,且优于DCP。HC Ⅱ:共测量49例ANHC和420例对照的HC Ⅱ血清浓度,ANHC的血清HC Ⅱ水平高于对照组,其中与慢性肝炎和正常对照组间差异具有统计学意义（P＜0.001）,在鉴别AFP阴性肝癌与慢性肝炎和正常对照有良好价值（AUC分别为0.832、0.843）,且优于DCP。HPR:共测量27例ANHC和161例对照的HPR血清浓度,ANHC的血清HPR水平低于对照组,其中与胃癌和正常对照组间差异具有统计学意义（P＜0.001）,在鉴别ANHC与正常对照时,HPR优于DCP且能达到优秀诊断价值,但例数较少。HPT:共测量47例ANHC和293例对照的HPT血清浓度,ANHC的血清HPT水平高于对照组,其中与肝硬化、慢性肝炎和正常对照组间差异具有统计学意义（P＜0.001）,在鉴别ANHC与肝硬化和全部对照有中等价值,鉴别慢性肝炎与正常对照具有良好价值（AUC为0.763-0.883）,且优于或与DCP相当。LRG1:共测量47例ANHC和324例对照的LRG1浓度,ANHC的血清LRG1水平低于对照组,其中与全部对照、肝硬化和正常对照组间差异具有统计学意义（P＜0.001）,在鉴别ANHC与全部对照、肝硬化和正常对照中具有中等至良好价值（AUC为0.703-0.847）,且优于或与DCP相当。SAA1:共测量45例ANHC和198例对照的SAA1浓度,ANHC的血清SAA1水平高于对照组,但与各对照组间差异不具有统计学意义（P＞0.05）,在鉴别AFP阴性肝癌与各对照组中不具有价值（AUC均小于0.6）。2.候选血清标志物联合的诊断价值:两个标志物和三个标志物联合分析,可有效提升诊断价值。两标志物联合中,A1AGP与SAA1联合诊断ANHC的价值最佳,AUC为0.893,敏感度、特异度和准确度分别为77.4%、93.7%和91.4%;三标志物联合中,DCP、HPT、A1AGP联合诊断ANHC的价值最佳,AUC为0.918,敏感度、特异度和准确度分别为85.2%、90.3%和89.9%。3.候选血清标志物区分ANHC与良性肝病的价值:在鉴别ANHC和良性肝病中,SAA2和HPT均有良好价值,AUC分别为0.829和0.815,A1AGP有中等价值,AUC为0.744,均优于DCP（AUC=0.616）,其余候选标志物无明显价值。结论:1.发现了几个对ANHC有诊断价值的候选血清标志物,其中SAA2诊断ANHC的价值优于DCP,HPT和LRG1与DCP相当,具有成为AFP阴性肝癌新诊断标志物的潜力;2.候选标志物联合检测可以有效提升对ANHC的诊断能力,其中A1AGP与SAA1两标志物联合和HPT、A1AGP、DCP三标志物联合对ANHC有较理想的诊断价值;3.部分候选标志物鉴别ANHC与良性肝病优于DCP,其中SAA2和HPT鉴别ANHC与良性肝病有良好价值;