创伤弧菌溶细胞素融合蛋白诱导人Caco-2细胞IL-8表达的研究

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yun0558
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:  研究创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVvhA)诱导人肠上皮细胞(humanintestinal epithelial cell,Caco-2) IL-8表达的作用,对于了解创伤弧菌所引发的粘膜屏障免疫有极为重要的意义,为创伤弧菌溶细胞素的细胞毒性机制提供一些实验依据。  方法:  1.诱导含pET-28a(+)vvhA重组质粒的BL21大肠杆菌表达创伤弧菌溶细胞素融合蛋白rVvhA,应用Ni2+-NTA亲和层析对rVvhA进行纯化,通过分步稀释与透析复性相结合方法对纯化后蛋白进行复性。  2.将rVvhA作用于人Caco-2细胞,应用CCK-8法测试复性后rVvhA细胞毒活性。发现在1.5HU/ml浓度时,抑制Caco-2细胞生长明显。  3.RT-PCR检测rVvhA作用Caco-2细胞后IL-8mRNA的表达、ELISA检测细胞培养上清IL-8分泌量。  结果:  1.含pET-28a(+)vvhA重组质粒的BL21大肠杆菌经0.5mmol/L IPTG30℃诱导4h后表达的融合蛋白分子量约为54kDa,电泳结果与该蛋白的理论预测值基本一致,表达量约为67%。表达的蛋白包涵体经三步洗涤与Ni2+-NTA树脂纯化后,纯度达99%。  2.纯化后的rVvhA经复性液复性后,作用于Caco-2细胞,发现rVvhA有细胞毒活性,能降低Caco-2细胞存活率,呈时间剂量依赖性。  3.RT-PCR检测出rVvhA作用Caco-2细胞后IL-8mRNA表达上调,rVvhA有效作用浓度为0.4HU/ml,效应时间为30min;上清中IL-8分泌量上调时相在4h。  结论:  rVvhA在转录水平上诱导人Caco-2细胞IL-8mRNA表达,促进IL-8的合成,在创伤弧菌引起的过度炎症反应和败血症的发生、发展中有着重要意义。
其他文献
我国在新的基础教育课程改革中明确提出了让课程结构更加合理,课程编排更具综合性和可供选择性的要求.落实在具体的小学语文课堂中,教师要以学生为核心,进行课程资源的整合,
随着社会的发展、教育观念的不断更新,课堂教学改革的逐步推进,传统的英语教学已经不能适应新时代的发展,提升初中英语课堂教学有效性,已是刻不容缓。本文从当前在初中英语课堂教
信息化技术是当今各门学科教学的有效辅助手段,运用信息化教学资源创设生活中的问题情景,激情引趣,有利于激发学生的学习兴趣,提高数学学习的有效性,能以独特的方式把复杂的知识简
本试验以八倍体小偃麦为桥梁亲本与普通小麦进行杂交,研究了不同杂交方式的当代结实率,不同杂种世代的育性和若干性状的遗传特点。结果表明:1.八倍体小偃麦与普通小麦没有明
该课题利用高血压动脉硬化大鼠复制的局灶性脑缺血模型,在缺血后注射胰岛素,观察胰岛素对脑梗塞的疗效和对脑组织c-fos、c-jun表达的影响.
课堂提问环节是教学过程中的关键环节,科学的提问能激发学生积极主动思考,激发学生学习英语这门学科的兴趣,增强学生的英语逻辑思维能力,这也是被广泛大量使用的一种教学方式,因此
摘要:新的课程改革要求高中物理教育不再是仅仅向学生传授课本上的知识,而是需要教师以教科书为载体带领学生探索和发现知识及相关规律并使学生学会自主学习。这就要求老师们重新调整“教”与“学”的关系,研究适应学生的教学手段,以达到最好的教学效果。我在课堂中采用了“小组合作学习”的方式开展物理课教学,探索物理教学的新模式。通过多次教学实践,随着一次次的反思、一个个问题的解决,我们的“小组合作学习”教学模式不
在解剖一成年男性尸体标本时,见1支右膈下动脉、2支左膈下动脉共干并自腹主动脉发出,查十年文献未见此种变异,为积累国人解剖学数值资料,报道如下。在腹主动脉前壁,腹腔干上
语文教育对学生的人生发展意义重大。语文是我们的母语,语文教学不仅承担着传承知识的重要责任,同时也承担着传承中华文明的巨大责任。初中语文教学对学生的人格发展和正确三观