论文部分内容阅读
目的:探讨长期应用高选择性NSAIDs(HSNAIDs)对大鼠实验性骨关节炎关节软骨代谢的影响。 方法:选用3-4月龄Wistar大鼠,采用左侧跟腱切除术诱发同侧膝关节骨关节炎(osteoarthritis,OA),术后2月形成膝OA模型。分为五组:赛来昔布(Celecoxib,CE)组,罗非昔布(Rofecoxib,RO)组,布洛芬(Ibuprofen,IBP)组,吲哚美辛(Indomethacin,IN)组,生理盐水(Normal saline,NS)组。药物剂量:赛来昔布,24mg/kg·day,罗非昔布3mg/kg·day,布洛芬72mg/kg·day,吲哚美辛9mg/kg·day。采用经口给药,其后3、6、9个月处死大鼠,取左膝关节标本,脱钙后关节软骨作HE染色、甲苯胺蓝染色光镜观察,透射电镜观察,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原的免疫组化检测,IL-1β、IL-1α、TNF-α免疫组化检测,采用TUNEL法检测关节软骨细胞凋亡。观察长期应用HSNSAIDs是否会加重OA关节软骨的损害。 结果:IN组Wistar大鼠不能完成第9个月的实验,余各组均顺利完成实验。 (1) HE染色光镜观察:CE组、RO组、NS组关节软骨光镜下观察类似,表现为OA的渐进发展过程,关节软骨表面不光滑,呈绒毛状外观,软骨细胞增生,CE、RO组关节软骨改变较NS组轻。IN组关节软骨损害明显重于NS组,3月时关节软骨层变薄,呈绒毛状外观,软骨细胞数量减少,排列紊乱;6月时可见胞核凝聚、破裂、溶解等不同程度的坏死表现。IBP组关节软骨表现介于二者之间。 (2) 甲苯胺蓝染色:短、中、长期应用HSNSAIDs(CE、RO)治疗OA,明显增加OA关节软骨基质蛋白多糖的含量,对损害的关节软骨有一定的修复作用,有利于关节软骨代谢。布洛芬的短、中期应用对OA关节软骨PG的含量无明显影响,其长期应用对关节软骨蛋白多糖的合成表现为抑制作用,明显减少软骨基质中PG的含量。吲哚美辛的短、中期应用能明显抑制关节软骨蛋白多糖的合成,减少软重庆医科大学博士研究生学位论文骨基质中PG的含量,加剧OA关节软骨退变的病理进程。 (3)电镜观察:CE组、RO组、NS组的软骨细胞表现类似,细胞外形基本正常,核膜清晰完整,染色质轻度边集,胞浆丰富;CE组、RO组可见发达的粗面内质网、线粒体及糖原。mP组:细胞周晕逐渐消失,胞核致密,外形不规则,核染色质结构模糊,高尔基复合体和粗面内质网数量减少,线粒体结构不清,胞浆内有多量的微丝及溶酶体样结构。IN组:软骨细胞的电子密度明显增加,软骨细胞溶解性坏死多见,胞浆、胞核的结构无法辨认。 (#)软骨细胞n型胶原表达影响:HSNsAIDs(CE、Ro)促进OA关节软骨细胞n型胶原的表达,n型胶原合成量增加,弥补OA时胶原的丢失,延缓关节软骨的退变。布洛芬亦促进OA关节软骨细胞对11型胶原的表达,n型胶原合成增加。叫睬美辛则抑制关节软骨细胞11型胶原的表达,加速退变软骨的n型胶原的降解,不利于关节软骨代谢。 (s)软骨细胞I、111型胶原表达的影响:HSNAIDs(cE、RO)对。A关节软骨细胞异常表型无明显影响或有一定促进作用,可促进OA关节软骨细胞I型胶原的表达。布洛芬、叫噪美辛明显促进软骨细胞胶原异常表型的变化,促进软骨细胞分泌I、m型胶原,改变软骨胶原纤维网架结构的成分。 (6)软骨细胞ILI表达的影响:cE、RO抑制软骨细胞IL一1的表达,抑制软骨基质的分解代谢,减轻OA关节软骨的损坏,对退变的关节软骨有一定的保护作用。IBP、IN在用药的不同时期对软骨细胞11表达的影响作用有所不同,其促进软骨细胞几~1的表达,加重软骨退变。 ⑦软骨细胞TNF.a表达的影响:cE、Ro抑制软骨细胞TNF一。的表达,减轻OA关节软骨的退变;随用药时间延长,其抑制TNF一a表达的作用增强。IBP的短、中期应用,促进软骨细胞TNF.Q表达,加重软骨基质的损害;随用药时间延长,IBP又表现为抑制TNF一a表达。州的短期应用促进软骨细胞 TNF一Q的表达,加重关节软骨损害;随用药时间延长,IN亦抑制TNF一Q表达。 (s)软骨细胞凋亡的影响:长期应用NS户dDs,cE、RO表现为持续抑制大鼠OA关节软骨细胞凋亡,延缓关节软骨的退变;水、IBP则促进软骨细胞凋亡,加重关节软骨的退变;IN促进软骨细胞凋亡在用药3月时达高峰,IBP在6月达高峰。 结论:HsN户dDs(CE、RO)可抑制大鼠。A关节软骨细胞的退变,促进软骨细胞n型胶原的表达,促进I型胶原的表达,抑制软骨细胞ILlp、TNF一a、ILI 重庆医科大学博士研究生学位论文a的表达,一定程度上抑制OA关节软骨细胞凋亡,增加OA关节软骨基质蛋白多糖的含量,延缓关节软骨退行性改变,对退变的关节软骨有一定的修复作用,其长期应用对OA关节软骨代谢是有益的。叫噪美辛可加重OA关节软骨的损害。布洛芬短中期应用对OA关节软骨代谢轻度不良影响,长期使用则不利于关节软骨的代谢。