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目的:研制表皮生长因子-透明质酸复合膜,通过动物实验观察其对皮肤切口愈合的影响,探讨表皮生长因子-透明质酸复合膜抑制瘢痕的作用机制,为临床应用提供实验依据。方法:1. 表皮生长因子膜、透明质酸膜及表皮生长因子-透明质酸复合膜的制备:透明质酸、表皮生长因子、聚乙烯醇配制前以分析天平称量。在超净台内,先用无菌生理盐水配制聚乙烯醇溶液,待完全溶解后,再分别放入表皮生长因子、透明质酸、表皮生长因子和透明质酸,用玻璃棒搅拌配制成均匀的凝胶,然后将凝胶平铺于玻璃板上,置低温干燥箱干燥后,制备成表皮生长因子膜,透明质酸膜,表皮生长因子-透明质酸复合膜,再用同样的方法制成聚乙烯醇膜,在超净台内切割成长5.5cm、宽1.0cm的膜。2. 72只SD雄性大鼠,随机分成四组,全麻下于背部脊柱两侧旁1cm处,平行脊柱分别做长约5cm的切口,切开皮肤、皮下组织,深达肌层,3~0丝线缝合。将表皮生长因子-透明质酸复合膜,表皮生长因子膜,透明质酸膜和聚乙烯醇膜(对照)无菌生理盐水浸湿后分别贴于四组动物的伤口,外用无菌纱布包扎。每日更换外敷膜1次,至术后14天。分别于术<WP=4>后3、5、7、9、14、21天每组处死3只动物,留取标本,做HE染色,masson染色,EGF、HA免疫组化染色及PCIII含量测定。结果:1.大体观察:术后3日,聚乙烯醇膜聚乙烯醇膜对照组,部分伤口有血迹,结痂,不易清洁,创周红肿;EGF-HA复合膜治疗组,伤口清洁,渗液较少,部分伤口有少许结痂,炎症反应轻,创周无明显红肿;EGF膜治疗组,表皮愈合倾向明显;HA膜治疗组类似于EGF-HA复合膜治疗组。术后5日,聚乙烯醇膜聚乙烯醇膜对照组,伤口大部分结痂,创周稍红肿,缝线处反应较重;EGF-HA复合膜治疗组表皮层愈合,无红肿,部分伤口有轻微缝线反应;EGF膜治疗组和HA膜治疗组类似于EGF-HA复合膜治疗组。术后7日,聚乙烯醇膜聚乙烯醇膜对照组,部分伤口处仍有血痂,部分缝线脱落,部分伤口仍有较重缝线反应;EGF-HA复合膜治疗组伤口愈合良好,表面清洁干净,部分缝线脱落;EGF膜治疗组和HA膜治疗组类似于EGF-HA复合膜治疗组。术后9、14、21天,聚乙烯醇膜聚乙烯醇膜对照组,伤口愈合良好,可见到明显的愈合线;EGF-HA复合膜治疗组伤口愈合良好,无明显的愈合线;EGF膜治疗组和HA膜治疗组类似于EGF-HA复合膜治疗组。2.HE染色观察:术后3天,聚乙烯醇膜对照组,表面见血凝块和炎性渗出物,表皮不连续,真皮切口未愈,裂隙较大,切口两侧可见成纤维细胞和炎细胞浸润;复合膜组,表皮层愈合,向真皮层轻微凹陷,棘细胞层增生,细胞<WP=5>层次清楚,真皮层部分愈合,成纤维细胞较多;EGF膜治疗组,表皮层愈合,棘细胞层增生,真皮层少部分愈合,大量成纤维细胞,少量炎细胞浸润;HA膜治疗组,表皮未完全愈合,真皮愈合优于EGF膜治疗组和聚乙烯醇膜对照组,次于复合膜组。术后5天,聚乙烯醇膜对照组,表皮层愈合,角化层形成,可见角质颗粒,棘细胞层增生明显,真皮少部分愈合,仍可见裂隙,裂隙上可见增生的成纤维细胞,炎细胞浸润;复合膜组,表皮愈合,角化程度较聚乙烯醇膜对照组轻,角质颗粒少,真皮层基本愈合,可见较多增生的成纤维细胞;EGF膜治疗组,表皮愈合,较平整,真皮未完全愈合,大量成纤维细胞和炎细胞浸润;HA膜治疗组,表皮层愈合,真皮愈合优于EGF膜治疗组和聚乙烯醇膜对照组,次于复合膜组,可见较多成纤维细胞。术后7天,四组表皮层均愈合,聚乙烯醇膜对照组,真皮未完全愈合,真皮成纤维细胞胞体粗大,成层状聚集排列,与愈合线垂直,有炎细胞浸润;复合膜组,真皮层愈合,成纤维细胞胞体较小,胞核细长,疏松排列,较规则;EGF膜治疗组,接近复合膜组,优于聚乙烯醇膜对照组;HA膜治疗组,真皮层未完全愈合,其它情况同复合膜组。术后9天,聚乙烯醇膜对照组,表皮有凹陷,角化较重,胶原排列有明显的方向性,较粗;复合膜组,表皮平坦,胶原束较小,在真皮浅层处排列接近正常组织;EGF膜治疗组、HA膜治疗组表皮基本平坦,胶原束较小,排列相对疏松。术后14、21天,聚乙烯醇膜对照组角化明显,胶原<WP=6>排列成束,致密,与切口线垂直;复合膜组、EGF膜治疗组、HA膜治疗组角化不明显,表皮层厚度基本正常、平坦,胶原束较小,排列相对疏松。3.masson染色:术后7天,聚乙烯醇膜对照组,绿色着色带较宽,切口两侧胶原排列相对致密胶原束粗大,与切口垂直;复合膜组,绿色着色带较窄,胶原束纤细,排列相对疏松,部分切口处胶原排列接近正常组织;EGF膜治疗组、HA膜治疗组,绿色着色带宽度介于复合膜组和聚乙烯醇膜对照组之间,新生胶原纤维量较少,胶原束纤细,排列相对疏松。4.HA免疫组化染色观察:复合膜组,3、5、7天表皮上层染色均为强阳性,第9天为阳性,表皮下层染色由阳性转为弱阳性,真皮层由强阳性转为阳性;EGF膜治疗组, 3天时表皮层强阳性,5、7天弱阳性,9天阴性,到第9天时,真皮层染色也由强阳性转为阳性;HA膜治疗组,表皮层染色除3天为强阳性,其它为阳性,第9天,真皮染色也由强阳性转为阳性;聚乙烯醇膜对照组,除7、9天基底层染色阳性外,表皮层均为阴性,3天真皮染?