剧毒无机氰化物（CN-）是目前工矿企业生产中难以淘汰的重要试剂,使用中的泄露或处理不当造成的污染时有发生,目前检测方法主要包括光谱法、色谱法、电化学法、流动注射法、荧光探针法和核磁共振法等。这些方法的共同不足是特异性较差,样品前处理需要加热蒸馏,使之无法用于现场检测。此外,利用氰化物对特定酶的非特异性抑制而建立的酶检测法也存在灵敏度不高,操作也不方便特点。因而,开发快速灵敏、特异性强、操作简单的现场检测方法对于污染现场处理非常必要。植物半胱氨酸合成酶（CSase）家族能特异性催化CN-和半胱氨酸（Cys）反应,产生硫化氢（H2S）,后者很容易检测,其生成量与CN-浓度呈线性关系。本研究首次依据此反应来特异性的检测环境样品中的氰化物含量。为了开发用于现场快速检测的技术手段,本研究对目标酶进行了原核表达、分离纯化、琼脂糖固定、催化动力力学特征测试,为后续研制现场快速检测试剂盒奠定了基础。首先,酶活性分析表明CSase家族氰基丙氨酸合成酶（CASase）活性可高效转化CN-。分析多种植物CSase的CASase的催化活性,发现苜蓿CSase最适合催化CN-和半胱氨酸的反应。通过对具有最高CASase活性苜蓿中CSase基因克隆和突变筛选,得到活性和耐热性较强的目标CSase突变形式MBs3-1K38N。其次,对目标CSase的原核诱导表达条件、基于镍柱的纯化,以及基于琼脂糖的固定等条件进行了系列优化。结果表明,CSase的原核表达以胞内可溶性表达存在于大肠杆菌中,超声破碎,镍柱纯化得到一定纯度的目标酶,琼脂糖固定后,不但进一步除去了少量杂质,而且明显改善酶的活性和稳定性。对固定化目标酶进行催化动力学参数分析,确定其最适温度为30℃,最适p H值为8,在4℃条件下存放60天后,其CASase活性可保存60%左右。然后,结合第二步显色反应的优化,确定了检测反应的各反应物浓度、固定化酶的稀释倍数和反应时间。最终建立了在30℃下,15 min之内完成检测的反应体系:（1）反应总体积1 ml;（2）Cys浓度为1 m M;（3）KCN浓度范围0.05-0.5m M;（4）反应介质Tris-HCI（p H=9-11）;（5）300μL用PBS（50 m M,p H=8）稀释5倍的固定化酶。在此检测条件下,水样中氰化物最低检测浓度可达0.05 m M（3.25 mg/L）。最后,为了便于检测浓度低于0.05 m M的样品,本研究还建立了有效的CN-浓缩技术。可将低于0.05 m M样品中CN-浓缩10倍以上。