固定化酶技术是现代生物工程技术的重要组成部分之一,在医学、食品、环境和分析等领域有着广泛的应用,是生命科学领域的研究热点。本论文对本实验室自制的高活性内切壳聚糖酶固定化条件及固定化酶的酶学性质进行了初步研究。目的:通过实验,选择固定化内切壳聚糖酶最适宜的载体与方法,制备出适合于实际生产的固定化内切壳聚糖酶,并对该固定化酶与游离酶的酶学性质进行比较研究,有助于指导低分散度壳寡糖批量生产。方法:1.使用改良的方法,制备较高氨基含量的硅胶载体,用于内切壳聚糖酶的固定化2.对氨基化硅胶、氨基化树脂、环氧化琼脂糖微球三种载体进行性质分析与检测,得出单位质量载体的功能基团含量。3.采用戊二醛法、三聚氯氰法、溴乙酸法、碳二亚胺法以及以环氧法制备固定化内切壳聚糖酶,并对其蛋白回收率、酶活回收率、相对酶活力进行比较,选用最佳的固定化酶载体与方法。4.对上述最佳的固定化酶方案进行优化,包括酶浓度、最佳的交联时间、交联温度、pH值以及交联剂的浓度等固定化条件的分析。5.对固定化内切壳聚糖酶的酶学性质进行初步研究,并与游离酶进行比较。结果:经固定化酶的活力回收率、酶蛋白交联率及稳定性测定,确定以氨基化树脂为载体,碳二亚胺法固定化效果最好。最佳反应条件为:酶浓度为2.5U/mL;水溶碳二亚胺(EDC.HCl)溶液为0.06mol/mL,交联时间为3h;最适交联pH值为6.5;最适交联温度为8℃。在最佳条件下制备的固定化酶活力为0.87U/g(湿重),酶活回收率为58.43%,重复使用6次后剩余酶活力为71.86%。结论:以氨基树脂作载体,水溶性碳化二亚胺(EDC.HCL)作催化剂,固定内切壳聚糖酶制备固定化酶,可用于生产低分散度壳寡糖。其酶活力与使用寿命还有待进一步提高。。