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肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)是我国重要的恶性肿瘤，其发生是宿主遗传因素、环境因素和病毒感染等多因素参与的渐进过程。在我国，乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)慢性感染是HCC最主要的危险因素，HBV基因型、HBVDNA滴度、HBeAg状态及HBV基因组变异等都与HCC发生相关。我国HBV感染者占全世界1/3，但是HCC发病数占全球50%以上，以及世界各地华人人群中HCC患病率普遍较高都提示中国人遗传易感性在HCC发生发展中发挥重要作用。炎症在HBV致癌和预后方面起重要作用，其中信号传导和转录激活因子3(Signal transducerand activators of transcription3, STAT3)是重要炎症信号通路JAK/STAT中的关键分子，其基因多态性通过该通路影响靶基因的表达水平，与HCC的发生相关。HBx蛋白可能通过miRNA激活并影响STAT3的水平，HBx与STAT3在HCC的发生中可能是相互作用的。因此，研究HCC相关的HBV变异和STAT3基因多态性及其在HCC发生发展中的交互作用具有重要的价值。目的：探讨HBV基因组EnhII/BCP/PC和preS区变异与慢性乙型肝炎(Chronichepatitis B, CHB)、肝硬化(Liver cirrhosis, LC)、HCC的关系，以及STAT3多态性(rs4796793, rs2293152, rs1053004)与HCC易感性间的关系。分析HCC相关HBV变异与STAT3基因多态性在乙肝阳性HCC发生发展中的交互作用，在群体水平揭示HCC的病毒和遗传危险因素，为进一步研究其相互作用机制提供线索，并为HCC的病因预防提供理论依据。方法：以1012例健康对照、990例非肝癌HBV感染者(316例ASCs、316例CHB、358例LC)及1021例HCC为研究对象，采用多重PCR法鉴定ASCs、CHB、LC、HCC样本的HBV基因型。使用巢式PCR法对四组样本HBV基因组EnhII/BCP/PC和preS区进行扩增，并对产物进行测序，用MEGA5.0和Bioedit7.0进行序列分析比对，检测各位点突变情况。利用荧光探针实时定量PCR法检测五组样本的STAT3基因多态性(rs4796793, rs2293152, rs1053004)。Hardy-Weinberg遗传平衡检验在Internet上进行(http://ihg.gsf.de/ihg/snps.html)。使用SPSS16.0进行数据录入与分析，应用t检验、方差分析、2检验和非条件Logistic回归模型分析HBV变异、STAT3多态性与HCC的关系及其在HCC发生发展中的相乘交互作用。结果：共有252例ASCs、172例CHB、224例LC、512例HCC样本获得EnhII/BCP/PC区序列。共有130例ASCs、164例CHB、194例LC和460例HCC样本获得preS区基因序列。1. HBV基因组EnhII/BCP/PC和preS区变异“热点”：EnhII/BCP/PC区的nt.1652、nt.1653、nt.1673、nt.1674、nt.1719、nt.1726、nt.1727、nt.1730、nt.1753、nt.1762、nt.1764、nt.1799、nt.1846、nt.1896共14个位点，preS区的preS deletion、preS2start codon、nt.2857、nt.2875、nt.2931、nt.2946、nt.2964、nt.3026、nt.3051、nt.3054、nt.3060、nt.3063、nt.3066、nt.3069、nt.3116、nt.3120、nt.3186、nt.3191、nt.1、nt.7、nt.10、nt.31、nt.49、nt.52、nt.53、nt.76、nt.105、nt.109、nt.135及nt.147共30个位点在HBV B或C型样本中变异频率≥20%，作为本次研究的变异“热点”。2. EnhII/BCP/PC和preS区变异与CHB、LC、HCC的关系：(1)以ASCs作为对照，经年龄和性别校正后，在基因型B中，A1762m、G1764m及preS2区12个位点的变异均能增加患CHB、LC、HCC的风险。在基因型C中，G1719m、A1762m、G1764m、A1846m、G1896m、A1m、C7m、C10m、A31m、T49m、A52m、G105m、C109m、A135m、G147m及preS2start codon变异增加患CHB、LC、HCC的风险，而A1652m、C1673m、C3051m、C3063m则能降低ASCs发展为CHB、LC、HCC的风险。(2)以CHB作为对照，经年龄和性别校正后，C1673m、A1726m、A1727m、C1730m、G1764m、C1799m、T2857m在C基因型中增加慢性乙肝患者进展为肝硬化的风险。在B基因型中，C3051m、C76m、preS2start codon变异降低CHB发展至LC的风险。(3)以CHB作为对照，经年龄和性别校正后，在C型HBV感染者中，C1653m、T1674m、G1719m、T1753m、A1762m、G1764m、preS deletion、T2857m、C2875m、C2931m、A3120m、A3186m、G3191m、T53m能增加CHB进展为HCC的风险。而nt1726变异在基因型B和C中都降低患HCC的风险。(4)以LC作为对照，经年龄和性别校正后，在C型中，C1653m、T1674m、G1719m、T1753m、A1762m、C2875m、C3026m、A3120m、C76m与LC进展为HCC的危险性显著相关。在B和C型中，nt.1673、nt.1726、nt.1727、nt.1730四个位点的变异均能降低LC进展至HCC的风险。(5)以ASCs和CHB作为对照分析HBV变异与LC的关系：发现经年龄和性别校正后，在B和C型中，nt.1652、nt.1719、nt.1726、nt.1727、nt.1764、nt.1896及preS2区除preS2start codon、nt.53、nt.76外所有位点变异均是LC的危险因素。(6)以ASCs、CHB、LC作为对照(non-HCC)分析HBV变异与HCC发生的关系：经年龄和性别校正后，在C型中，C1653m、T1674m、G1719m、T1753m、A1762m、G1764m、A1846m、G1896m、preS deletion、T2857m、C2875m、C3026m、A3186m显著增加患HCC的风险。除preS2start codon、nt.7、nt.53外，preS2区其他位点上的变异在B和C基因型中均增加HCC的发生风险，而nt.1652、nt.1673、nt.1726、nt.1730、nt.1799五个位点上的变异均降低患HCC的风险。(7)在HBeAg阴性状态下，在HBV C型中，nt.1653、nt.1719、nt.1762的变异增加LC进展为HCC的风险。而nt.1652、nt.1673、nt.1726、nt.1730的变异降低患HCC的风险。HBeAg阴性HCC在nt.1653、nt.1674、nt.1846、nt.1896四个位点的变异频率显著高于HBeAg阳性HCC (P=0.000)。3. HBV变异与HCC和LC相关性的多因素分析(1)非条件Logistic回归分析显示，除年龄、性别、HBeAg阴性、基因型C外，EnhII/BCP/PC区的T1674C/G (AOR=2.03,95%CI=1.34-3.07)、A1762T/G1764A(AOR=2.74,95%CI=1.91-3.94)、G1896A (AOR=2.05,95%CI=1.44-2.92)及preS区的preSdeletion (AOR=1.82,95%CI=1.14-2.91)、preS2start codon变异(AOR=1.99,95%CI=1.20-3.30)、C2875A (AOR=1.98,95%CI=1.17-3.36)、C7A (AOR=4.96,95%CI=2.78-8.84)、C76A(AOR=11.40,95%CI=4.80-27.06)是HCC的独立危险因素。(2)应用相同的非条件Logistic回归模型对LC的危险因素进行分析，发现除年龄外，EnhII/BCP/PC区的A1762T/G1764A (AOR=2.37,95%CI=1.44-3.91)、G1896A(OR=2.75,95%CI=1.64-4.60)及preS区的preS deletion (AOR=4.96,95%CI=2.20-11.19)、T2857C (AOR=6.98,95%CI=2.47-19.72)、T3026C (AOR=2.15,95%CI=1.12-4.11)是LC的独立危险因素。4. STAT3基因多态性与肝细胞癌易感性间的关系(1)与健康对照组比较，携带rs2293152GG基因型显著增加HCC的发病风险(OR=1.30,95%CI=1.02-1.66)。与健康对照组比较，携带rs1053004CT基因型或C等位基因(CT+CC)显著增加HCC的发病风险(OR=1.26,95%CI=1.04-1.53; OR=1.22,95%CI=1.02-1.45)，同时也显著增加患非肝癌HBV相关肝脏疾病的风险(OR=1.33,95%CI=1.10-1.61; OR=1.26,95%CI=1.05-1.51)。(2)按性别进行分层以后，在男性中，与健康对照组比较，携带rs4796793GG基因型显著增加患HCC和非肝癌HBV相关肝脏疾病的风险(OR=1.38,95%CI=1.01-1.88; OR=1.40,95%CI=1.00-1.95)。与健康对照组比较，携带rs1053004CT基因型或C等位基因(CT+CC)显著增加男性患HCC的风险(OR=1.27,95%CI=1.03-1.57;OR=1.27,95%CI=1.04-1.55)，同时也显著增加患非肝癌HBV相关肝脏疾病的风险(OR=1.33,95%CI=1.07-1.68; OR=1.29,95%CI=1.05-1.60)。在女性中，与健康对照比较，携带rs2293152GG基因型增加HCC的发病风险(OR=2.43,95%CI=1.38-4.29)，与非肝癌HBV感染者比较，携带rs2293152GG基因型也增加HCC的发病风险(OR=1.92,95%CI=1.12-3.31)。与健康对照组比较，携带rs1053004CC基因型降低女性HCC的发病风险(OR=0.48,95%CI=0.23-0.97)。但是由于女性HCC病例少，此结果还需在大样本中进行验证。(3)按HBV基因型进行分层以后，在C型样本中，以rs2293152CC基因型作为对照，与非肝癌HBV感染者比较，携带GG基因型增加HCC的发病风险(OR=1.67,95%CI=1.17-2.36)。5. STAT3基因多态性与乙肝病毒变异及基因型的交互作用(1) rs2293152多态性与EnhancerII/BCP/PC区HBV变异交互作用：经年龄、性别等因素校正后，分别以rs2293152CC及T1674C/G、A1762T/G1764A、G1896A的野生型作为对照，发现rs2293152GG分别与C/G1674、T1762/A1764、A1896变异同时作用在C型HBV感染者中显著增加HCC发病风险(OR=3.27,95%CI=1.26-8.44;OR=7.61,95%CI=3.02-19.13; OR=4.63,95%CI=2.01-10.66)，但是rs2293152多态性与T1674C/G、A1762T/G1764A、G1896A之间不存在交互作用。(2) rs1053004多态性与EnhancerII/BCP/PC区HBV变异交互作用：经年龄和HBV基因型校正后，分别以rs1053004TT与T1674C/G、A1762T/G1764A、G1896A野生型作为对照，发现rs1053004CT分别与C/G1674、T1762/A1764变异同时作用在男性中显著增加HCC发病风险(OR=2.17,95%CI=1.17-4.03; OR=2.91,95%CI=1.67-5.06)，且rs1053004多态性与T1674C/G在HCC发生发展中具有相乘交互作用(OR=2.53,95%CI=1.10-5.78)。在女性中，rs1053004CT分别与C/G1674、T1762/A1764、A1896变异同时作用显著增加HCC发病风险(OR=2.97,95%CI=1.06-8.33; OR=4.54,95%CI=1.76-11.72; OR=2.79,95%CI=1.21-6.43)，但是不存在交互作用。(3) HBV基因型与STAT3基因多态性在HCC发生发展中的交互作用以HBV基因型B和rs4796793CC作为对照，经年龄、性别和HBeAg状态校正后，HBV C型与rs4796793GG共同作用显著增加HCC风险(OR=1.77,95%CI=1.04-3.01)；以基因型B和rs2293152CC作为对照，HBV C型与rs2293152GG共同作用显著增加HCC风险(OR=3.22,95%CI=1.79-5.81)；以基因型B和rs1053004TT作为对照，HBV C型与rs1053004CT共同作用显著增加HCC风险(OR=1.79,95%CI=1.14-2.82)。但是，HBV基因型与rs4796793、rs2293152、rs1053004之间不存在相乘交互作用。结论：1.年龄、男性、HBV基因型C、HBeAg阴性、T1674C/G、A1762T/G1764A、G1896A、preS deletion、preS2start codon变异、C2875A、C7A、C76A是HBV相关HCC的独立危险因素。2.年龄、A1762T/G1764A、G1896A、preS deletion、T2857C、T3026C是LC的独立危险因素。3.携带rs2293152GG基因型增加HCC患病风险，rs1053004CT基因型或C等位基因与HBV慢性感染相关。在男性中，STAT3-1697GG基因型及rs1053004CT基因型或C等位基因与HBV慢性感染相关；在女性中，携带rs2293152GG基因型增加HBV慢性感染及感染后致HCC的风险，但是需要更大样本量验证。4. rs2293152GG基因型增加C型HBV感染者发生HCC的风险。5. T1674C/G变异与rs1053004多态性在男性HCC发生过程中存在显著的相乘交互作用。