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牛乳蛋白质主要包括乳清蛋白（20%）和酪蛋白（80%），酪蛋白又分为四类，即αs1-酪蛋白、αs2-酪蛋白、κ-酪蛋白和β-酪蛋白，其中β-酪蛋白占酪蛋白总含量的36%，且含量稳定。因此，我们可以利用牛乳中β-酪蛋白的含量来检测牛乳样品是否掺假。本研究以β-酪蛋白为免疫原，足垫快速免疫方法免疫6-8周龄的雌性BALB/C小鼠，经过两次免疫后用间接ELISA检测方法检测免疫小鼠的血清效价；利用PEG做融合剂进行细胞融合，ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞；采用有限稀释法对筛选出的阳性杂交瘤进行亚克隆，经过三次亚克隆后筛选得到了一株能够稳定分泌β-酪蛋白单克隆抗体的细胞株4H1，单克隆抗体的亚类鉴定结果为IgG2a；用小鼠腹腔诱生腹水的方法制备大量的单克隆抗体，再分别用蛋白A亲和层析柱和辛酸-硫酸铵法纯化腹水，两种方法纯化后的腹水效价均能达到100万，单克隆抗体的亲和常数为5.29×108mol L-1。用纯化后的腹水建立并优化了两种ELISA检测方法。一种是基于酶标板的夹心ELISA检测方法，建立了β-酪蛋白的酶标板-夹心ELISA检测的标准曲线，线性回归方程为y=1.2314x-0.4135，R2=0.9951（相关系数），线性检测范围为0.1-10.0μg mL-1。另一种是基于免疫磁珠的夹心ELISA方法，建立了免疫磁珠-夹心ELISA检测的标准曲线，检测方法的线性回归方程为y=4.3782x-0.7154，相关系数R2为0.9706，线性检测范围为2-128μg mL-1。由于免疫磁珠表面积大，与酶标板微孔相比能够包被大量的单克隆抗体，反应充分迅速，每一步反应只需要10分钟，利用免疫磁珠-夹心ELISA方法检测牛奶中的β-酪蛋白，整个检测过程只需要30分钟，所以这种方法的检测时间与常规的酶标板夹心ELISA相比明显缩短，提高了检测效率。