HBX蛋白调控Gankyrin致肝细胞癌的机制研究

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目的:研究HBX基因对Gankyrin表达水平的影响以及Wnt/β-catenin信号通路在HBX基因调控Gankyrin表达中的作用,试图阐明乙肝相关性HCC的发病过程中可能的分子机制。方法:1.运用RT-PCR与Western-blot技术分别从mRNA水平和蛋白质水平检测Gankyrin在HepG2与HepG2.2.15细胞中的表达水平;2.Ad—HBX感染HepG2与SMMC-7721细胞,运用RT-PCR与Western-blot技术分别从mRNA水平和蛋白质水平检测Gankyrin的表达情况;3.用脂质体将siRNA-HBX分子转染HpeG2.2.15细胞,运用RT-PCR与Western-Blot技术分别从mRNA水平和蛋白质水平检测Gankyrin的表达情况;4.Ad—β-catenin转染HepG2、SMMC-7721细胞,Western-blot法检测β-catenin与Gankyrin的表达情况;5.在沉默β-catenin的HepG2、SMMC-7721细胞中过表达HBX基因,Western-blot法检测β-catenin与Gankyrin的表达情况。结果:1. HepG2.2.15细胞Gankyrin表达水平比HepG2细胞Gankyrin表达水平高;2. HepG2与SMMC-7721细胞系中Ad—HBX-GFP组较Ad—GFP组,Gankyrin表达水平明显升高;3. HepG2.2.15细胞中Si-HBX组较Si-NC组,Gankyrin表达水平明显下降;4.在HepG2与SMMC-7721细胞系中过表达β-catenin后,Ad—β-catenin-GFP组较Ad-GFP组Gankyrin的表达水平较对照组明显上调;5.在HepG2与SMMC-7721细胞系中沉默β-catenin后,过表达HBX基因,Gankyrin的表达水平未见升高.结论:通过在人肝癌细胞株中调控HBX基因与Wnt/β-catenin信号通路核心蛋白β-catenin的表达,证明人肝癌细胞细胞中Gankyrin的表达水平与HBX的表达水平密切相关;HBX通过Wnt/β-catenin信号通路调控Gankyrin的表达;抑制β-catenin的功能可阻遏HBX对Gankyrin的上调作用,本结果将可能为HCC的治疗提供新的思路。
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