前言 胶质瘤单抗是1981年Schegg率先研制成功的。由于血脑屏障的存在，鼠源性单抗对人体而言是异种蛋白，分子量大，临床应用中受到一定的限制。为此小分子人源化的抗胶质瘤单抗随着分子生物学的深入发展应运而生，但在临床上得到应用的极为少见，原因在于其特异性差、活性低。鼠源性杂交瘤单抗则因其效价高，特异性好的优势，临床应用的势头未减，建立杂交瘤细胞株仍然是获取单抗的主要手段。本实验在当年建立SZ38、SZ39方法的基础上，进行适当改进，旨在建立一株新型、具有高效、高特异性、高产的杂交瘤细胞株。 1．SU-2000杂交瘤细胞株的建立目的：制备新的分泌抗人脑胶质瘤单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法：①利用SHG-44胶质瘤细胞作为抗原免疫BALB/c小鼠，取脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合，通过HAT选择性培养，使目的细胞增殖并形成克隆；②分别利用SHG-44细胞、正常脑组织的总蛋白作为阳性、阴性抗原包板，行ELISA检测，筛选出阳性孔：③对阳性孔进行单克隆化，证实杂交瘤细胞100％分泌单抗后，予冻存、保种；④小鼠腹腔注射杂交瘤细胞，获取含单抗的腹水；⑤半年后按常规方法复苏杂交瘤细胞。结果：①HAT选择性培养后，有26孔出现杂交瘤生长；②ELISA检测，筛选出一个阳性孔；③经过多次单克隆，杂交瘤细胞100％分泌单抗；④小鼠腹腔注射杂交瘤细胞后，获得含大量单抗的腹水：⑤半年后，复苏杂交瘤细胞5次，均获成功。结论：初步建立起一株分泌抗人脑胶质瘤单克隆抗体的杂交 抗人脑胶质掩单克隆抗体SU－2000的建立及其识别抗原的提职 中文摘要 瘤细胞株，命名为SU毛000（苏大上000年人 2·SU－2000单抗的鉴定 目的：对SU上000单抗的重要特征进行鉴定，为进一步的应用提供依据。 方法：①亚类鉴定：抗小鼠 IgG、IgGZa、IgGZb、IgG3重链单抗作为分 型抗体，采用双向免疫扩散法进行亚类分析；②效价测定：SHG＊4胶质 瘤细胞作为抗原包板，分别将腹水及纯化单抗进行倍比稀释，通过ELISA 检测鉴定腹水效价及抗原抗体的结合力；③组织特异性分析：肿瘤及正 常人体组织标本制成石蜡切片，细胞制成悬液涂在玻片上，冷丙酮固定， 纯化的SU毛000单抗作为一抗进行兔疫组化染色。④单抗识别抗原的定 位：SHG44细胞培养在玻片上，冷丙酮固定，纯化的SU上000单抗作为 一抗，分别行免疫荧光和免疫组化染色。结果：①SU上000单抗和抗 IgG 之I司出现了沉淀线；②腹水经 l：204800稀释后仍能和 SHG－44胶质瘤细 胞起反应，1．33mg／ml的单抗经卜 102400稀释后仍能和 SHG44细胞起 反应；③S＊《000单抗和8例星形胶质瘤均起阳性反应：和4例脑膜瘤。 二例脑转移癌呈阴性反应；与颅外肿瘤的反应中，除黑色素瘤外，均呈阴 什反）。 和 16种人体正常组织尤 出现阳性反应；④免疫荧光及免疫组 化染色表明，SHG＊4胶质瘤细胞上以胞膜染色为主，胞浆可能也有染色。 结论：SU上000单抗属IgGI亚类，识别的抗原主要位于胞膜，达到了效 价高、特异性好的质量标准。 3．SU－2000识别抗原的提取 目的：提取SU习000识别的抗原，为胶质瘤疫苗的制备创造条件。方法： 将乡化的 SU－2000单抗和 BrCN－Sepharose－4B偶联制成层析柱，习裂解 SHG斗4细胞获得的总蛋白加入层析柱，在恒流泵的推动下循环过柱，16 小时后将结合的抗原洗脱、提取c结果：ELISA检测表明：提取的抗原 且且 一 抗人脑肢质瘤单克隆抗体SU－2000的建立及其识别抗原的提耿 中文摘要 和 SU毛000单抗呈强阳性反应；SDS．PAGE电泳、Western blot表明：抗 原提取液所在的泳道75KD处出现了清晰条带；提取的抗原和 SU上000 单抗呈阳性反应。结论：SU上000单抗识别的抗原具有纯度高，活性好， 分子量约为75KD，可能为新的胶质瘤相关抗原。