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目的胰岛移植发展前景良好,但仍面临着需要供胰量大、存活率较低,自身免疫性疾病复发所致移植物失功等问题。众多因素影响胰岛移植效果中,胰腺的缺血时间一直被认为是最重要的因素之一。大鼠与人的胰岛在许多方面有着共同特点随着胰腺移植例数的逐年增加,无心跳供体(non-heart-beating donor,NHBD)器官的利用成为热点问题,NHBD供胰不可避免地经历了一段热缺血损伤,探讨供胰热缺血损伤安全时限及其与术后移植物功能状态的关系有重要意义。然而,到目前为止对供胰耐受热缺血时限仍缺乏定论,日本学者认为热缺血的安全时限＜30分钟;美国学者则认为＜15分钟。本实验旨在观察不同热缺血时间对大鼠胰岛分离纯化结果的影响,为临床胰岛移植供者的选择提供依据。材料与方法1、实验动物及分组本实验采用雄性Wistar大鼠(中国医科大学实验动物中心提供),体重250～300g。大鼠秤重后,腹腔注射麻醉。腹部正中切口进腹。剪开膈肌,用血管钳夹闭心脏基底部致使心脏停搏,阻断胸主动脉,造成无心跳供体(NHBD)的热缺血模型。根据热缺血时间的不同将大鼠随机分为4组,每组10只。在大鼠心跳停搏后,第1组至第4组大鼠,分别为0分钟、15分钟、30分钟、45分钟予以4℃UW液保存8h,再将10 ml胶原酶溶液注入胰腺。2、胰岛的获取用UW液原位灌注大鼠胰腺后切取并放置于UW液中低温保存。向大鼠胰管内逆行灌注胶原酶溶液使胰腺充分膨胀,放在3711℃水浴中振荡消化12-15 min。终止消化后,两次离心洗涤,经80目不锈钢筛过滤,Ficoll梯度离心法纯化胰岛,浓度分别为25%,23%,20.5%和11%,从23%和20.5%之间交界处及20.5%和11%之间交界处吸取胰岛、。3、观察指标获取的胰岛用双硫踪(DTZ)染色来计算分离胰岛数目并判断所提胰岛的纯度,丫吮橙/澳乙陡(AO/EB)荧光染色法显示胰岛细胞活率,体外葡萄糖刺激下胰岛素释放试验及兔抗鼠胰岛素抗体免疫组织化学染色检测胰岛活性。4、统计学分析将所得数据用均值士标准差表示,采取方差分析q检验,P＜0.05认为有统计学意义,所有数据用SPSS11.5软件处理。结果NHBD大鼠热缺血时间在30分钟以内各组获得胰岛的数量、纯度、活率及活性与0分钟组相比无明显差别(P＞0.05)。NHBD大鼠热缺血时间在45分钟组获得胰岛的数量、纯度、活率及活性与0分钟组相比有明显差别(P＜0.05),低于临床上的胰岛移植标准(活性＞75%,纯度＞50%)。结论1、热缺血时间在15分钟以内,对NHBD大鼠胰岛分离纯化无影响。2、热缺血时间在15到30分钟内,对NHBD大鼠胰岛分离纯化无明显影响,可用于胰岛移植。3、热缺血时间超过30分钟,对NHBD大鼠胰岛分离纯化可产生明显影响,不宜用于胰岛移植。