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大口黑鲈（Micropterus salmoides）隶属鲈形目（Perciformes）、太阳鱼科（Centrarchidae）、黑鲈属（Micropterus）,原产于北美淡水水域,是重要的游钓鱼类。大口黑鲈于20世纪80年代由中国台湾省引进,由于其肉质鲜嫩且无肌间刺,广温性、生长快及易捕捞等优点,已成为我国重要的淡水养殖品种之一。随着大口黑鲈养殖规模的扩大,在高温季节,各类病害问题的频繁发生已经成为制约产业发展的一个因素,在高温季节维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）引起的大口黑鲈暴发性死亡近几年不断发生,但目前对于大口黑鲈抗维氏气单胞菌免疫机制了解甚少。本研究利用转录组技术,对高温胁迫下大口黑鲈感染维氏气单胞菌死亡率的差异进行探究。此外,基于大口黑鲈全基因组与转录谱数据,展开大口黑鲈ASC基因的研究,分析其基因结构与功能、预测蛋白结构与功能、了解基因表达情况以及细胞定位,为深入开展大口黑鲈抗菌机制研究奠定基础。主要研究内容如下:1.大口黑鲈源维氏气单胞菌的分离鉴定为查明2020年春季广东省佛山市某养殖场人工养殖大口黑鲈鱼苗出现暴发性死亡的病因,该研究对患病大口黑鲈鱼苗肝脏组织中分离的一株细菌GZXR2020进行了分子鉴定,PCR扩增获得该菌株的16S rRNA基因和gyrB基因全长序列,BLAST显示其与维氏气单胞菌的相应序列高度同源,同源性分别高于99.5%和98.3%。根据VITEK2全自动细菌鉴定系统45个理化项目的鉴定结果、羊血琼脂平板溶血实验呈β-溶血的结果,进一步通过毒力基因检测并结合补充理化鉴定结果,可判断此分离菌株为维氏气单胞菌温和生物型（A.veronii bv.sobria）。人工回归感染实验采用低、中、高3种菌液浓度(3×10~7、1.5×10~8和3×10~8CFU·m L-1)进行腹腔注射攻毒,可分别导致7%、40%和100%的死亡率,证实维氏气单胞菌温和生物型是引起此次大口黑鲈暴发性死亡的致病原。药物敏感性实验显示,在所检测的17种抗菌药物中,该菌株对大观霉素、氟罗沙星、氟苯尼考等7种药物敏感。2.高温胁迫下大口黑鲈免疫反应与表达为了了解大口黑鲈对热应激反应的分子机制,我们对热应激条件下的大口黑鲈（LMB）脾脏组织进行了转录组分析,并用A.veronii在热应激条件下对其进行了感染。处理7 d后,热应激组（32°C）和对照组（24°C）之间共鉴定出2162个差异表达基因。GO注释分析表明,GO注释分析揭示出这些DEG主要富集在的生物调节、膜部分和结合方面。ELISA验证表明,除Mhc II外t-Sod,Casp3,Tnf-α和C3的蛋白水平与RNA-seq结果一致。在热应激（32°C）条件下,维氏气单胞菌感染实验中,热应激组获得2899和2663个差异表达基因（H6 vs H0,H12 vs H0）,而对照组分别获得1485和3501个差异表达基因（C6 vs C0,C12 vs C0）。GO和KEGG富集分析表明,显著富集到免疫相关的GO分类和通路。补体途径和凝血途径中f11、c1q和c3的表达以及促炎基因tnf-α和il-8的表达均受到明显抑制。对9个DEG的qPCR验证表明,它们中的大多数与RNA-seq结果具有一致的表达趋势。我们的结果表明,热应激影响大口黑鲈的免疫和代谢。尤其是在下调促炎细胞因子表达的同时,加重了维氏气单胞菌对补体和凝血系统的抑制作用,从而削弱了大口黑鲈对病原体感染的抵抗力。我们的研究结果有助于阐明热应激下维氏气单胞菌感染大口黑鲈的致病机制。3.大口黑鲈（Micropterus Salmoides）凋亡相关斑点样蛋白（ASC）的识别及特性分析凋亡相关斑点样蛋白（ASC）是多种炎性小体蛋白复合体中的关键接头分子,介导炎症和宿主防御。本研究从大口黑鲈（Micropterus salmoides）肝脏组织中鉴定克隆了一个ASC基因（命名为Msasc）。Msasc全长c DNA序列573 bp,编码190个氨基酸组成。蛋白结构预测显示Ms Asc含有两个保守的结构域,包括吡咯环结构域pyrin domain（PYD）和半胱天冬酶招募结构域caspase recruit domain（CARD）。使用qPCR方法检测大口黑鲈Msasc m RNA的组织分布,在所检测的心脏、鳃与肝脏等8种组织中均可检测到该基因的表达,其中心脏、鳃与肝脏组织中的表达水平较高,脑部的表达最低。在感染维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）的大口黑鲈脾脏和肝脏组织中,感染24 h Msasc的表达达到高峰。细胞转染实验显示,Msasc在Hela细胞中为弥散样分布。免疫激发实验表明,炎性小体刺激物尼日利亚菌素（nigericin）能明显诱导Hela细胞中Ms Asc的凝集。这些结果提示Msasc参与了大口黑鲈抗维氏气单胞菌的免疫过程。本研究为深入了解Msasc在大口黑鲈抗菌中的功能奠定基础。