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目的：通过优化细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-induced killer cells, CIK细胞)的培养体系,提高CIK细胞的增殖能力和分泌细胞因子的能力,进而增强CIK细胞效应细胞的杀伤能力,改善治疗肿瘤的效果。方法：选取2011年8月至2012年1月在郑州大学一附院行生物治疗的肿瘤患者外周血32人份,提取外周血单个核细胞,用RPMI1640培养基重悬后平均分为四组,按照CIK细胞培养流程进行培养,第0d在第一组中添加N-乙酰-D-乳糖胺(N-acetyl-D-lactosamine, LacNAc),第二组中添加LacNAc和抗-CD28单克隆抗体(抗-CD28mAb),第三组中添加抗-CD28mAb,第四组中添加等量的双蒸水。在培养过程中分别在第4、8、10、12、14d用细胞计数法测定细胞增殖,在第7d用CFSE染色测定细胞增殖,在培养至12d从各组细胞中分别取1×106个细胞,检测其分泌细胞因子IL-2、IL-10、IFN-γ以及TNF-α的能力,培养14d后检测CIK细胞的细胞表型以及CIK细胞对靶细胞K562的杀伤能力。结果：(1)各组中CIK细胞形态变化及增殖：在培养过程中在倒置显微镜(4×20)下观察细胞形态,细胞体积逐渐变大,细胞浆越来越丰富,细胞核逐渐增大。第2-4d细胞开始聚集,成簇状克隆样生长,在镜下观察不到各组之间细胞形态的差异,在细胞计数的每个时间点LacNAc组、LacNAc联合抗-CD28mAb组以及抗-CD28mAb组CIK细胞增殖的速度较对照组快,且具有统计学意义(F=3.945,P<0.05；F=2.341,P>0.05；F=72.121,P<0.05；F=121.118,P<0.05；F=32.973,P<0.05)。(2)各组间分泌细胞因子的量：LacNAc组、LacNAc联合抗-CD28mAb组以及抗-CD28mAb组分泌细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α的分泌量均较对照组高,且差异有统计学意义(F=5.87,P<0.05；F=4.79,P<0.05；F=5.2,P<0.05),而前三组之间两两进行比较没有明显差异(P>0.05)。(3)各组之间各种细胞所占比率：各组之间进行比较发现LacNAc组、LacNAc联合抗-CD28mAb组以及抗-CD28mAb组的CD8+细胞所占比例较对照组的高,且差异具有统计学意义(F=5.03,P<0.05),前三组中CD4+T淋巴细胞所占比率较对照组的低,且差异具有统计学意义(F=4.63,P<0.05),而LacNAc联合抗-CD28niAb组中CD8+/CD4+的比值较对照组高,且差异具有统计学意义(F=5.72,P<0.05),而LacNAc组和抗-CD28mAb组与对照组CD8+/CD4+的比值比较无明显差异(P>0.05)。各组之间CD3+CD56+细胞所占比率差异均无统计学意义(P>0.05)。(4)各组间对靶细胞K562的杀伤效能：对照组效应细胞对靶细胞K562的杀伤率较LacNAc组、LacNAc联合抗-CD28mAb组、抗-CD28mAb低,且差异具有统计学意义(F=6.68,P<0.05)。而LacNAc组、LacNAc联合抗-CD28mAb组以及抗-CD28mAb组三组之间两两比较差异无统计学意义(P>0.05)结论：(1) LacNAc和抗-CD28mAb(?)有效提高CIK细胞群的增殖速度,LacNAc f口抗-CD28mAb均对CD8+T淋巴细胞具有促进扩增的效果,而对CD4+T细胞的效果不明显；(2) LacNAc和抗-CD28mAb可以促进CIK细胞分泌IL-2、IFN-γ及TNF-α等细胞因子,且LacNAc和抗-CD28mAb的这种促进作用具有协同效应；(3) LacNAc和抗-CD28mAb提高了CIK细胞对白血病细胞系K562的杀伤能力。新的培养体系优于原来的培养体系。