血管内皮生长因子基因治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤的实验研究

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gsdx2009
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目的:新生儿缺氧缺血性脑病(Hypoxic-ischemic encephalopathy HIE)是新生儿的常见疾病,其病情重,病死率高,并可产生永久性神经功能障碍。缺氧缺血是HIE发生的本质。改善新生儿脑缺氧,减轻脑损伤,对脏的预后具有重要意义。血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF),又称血管通透因子(Vascular pleamity factor VPF),作用于血管内皮细胞VEGFR,通过细胞内信号传导系统,最终导致血管内皮细胞的增殖,迁移及诱导血管生成,同时VEGF具有减少神经细胞凋亡,神经保护等生物学作用。本实验根据VEGF的这些生物活性,将负载有鼠VEGF120cDNA的真核表达质粒pCDNA 3.1注射至新生鼠缺氧缺血脑损伤局部,探讨VEGF对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(Hypoxic-ischemic brain damage HIBD)的治疗作用。 方法:一、构建真核表达载体PCDNA3.1/rVEGF120。二、通过结扎左颈总动脉,吸入8%氧气制备左脑HIBD的新生鼠模型。三、将48只7日龄SD大鼠随机分为两组:(一)、对照组制备HIBD后,即刻通过前囟注射空载质粒100μg/只,回笼喂养7天;(二)、治疗组,制备HIBD模型后,即刻通过前囟注射载有rVEGF120基因的质粒100μg/只,回笼喂养7天。在规定时间内,断头处死,即刻取出大脑,每组各取6例。三、免疫组化 脑组织在经4%甲醛固定后,常规石蜡包埋,应用LSAB法检测VEGF蛋白的表达情况。四、蛋白点杂交 取新鲜脑组织,提取总蛋白,用点杂交仪加样后,测定VEGF蛋白的表达情况。五、流式细胞仪 将脑组织制成单细胞悬液后,上机检测脑细胞的凋亡情况。 结果:免疫组化及蛋白点杂交结果示:治疗组VEGF蛋白表达明显高于对照组(灰度分析P<0.05),免疫组化示:VEGF高表达于缺血大脑皮质,海马的神经细胞,胶质细胞,及血管内皮细胞(P<0.05)。流式细胞仪结果示:治疗组的脑细胞凋亡率明显低于对照组(P<0.05)。 结论:一、脑内注射外源性VEGF基因,在大脑皮质及海马处神经细胞,神经胶质细胞及血管内皮细胞胞浆中高度表达。二、外源性的VEGF可以减少脑细胞的凋亡。本实验的研究为H刃BD的治疗提供一条新的探索途径。
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