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目的:探讨G蛋白信号调节蛋白2(G-protein-signaling modulator 2,GPSM2)在CD133~+胰腺癌干细胞亚群和CD133~-胰腺癌细胞亚群中的差异表达。研究GPSM2下调表达对CD133~+胰腺癌干细胞的增殖能力、克隆形成能力及迁移能力的影响。方法:本研究通过蛋白质印迹法(Western Bloting,WB)预实验选取GPSM2蛋白表达水平较高的胰腺癌PANC-1细胞系作为实验细胞系。以胰腺癌干细胞(Pancreatic cancer stem cells,PCSCs)表面分子标志物CD133为筛选标志,应用流式细胞分选术(Flow CytoMetry,FCM)从胰腺癌PANC-1细胞系中分选出CD133~+PANC-1细胞亚群和CD133~-PANC-1细胞亚群,通过裸鼠皮下成瘤实验及细胞周期实验进一步鉴定CD133~+PANC-1细胞亚群的干细胞特性;分别应用实时-逆转录聚合酶链反应实验(quantitative real-time Reverse Transcription PCR,RT-qPCR)和WB法检测GPSM2在CD133~+和CD133~-PANC-1细胞亚群中的差异表达;应用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)构建针对GPSM2基因的短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)的慢病毒载体,将慢病毒载体包装成病毒颗粒后感染CD133~+PANC-1细胞亚群并筛选出稳转细胞株;分别应用RT-qPCR和WB实验验证GPSM2的抑制效率;应用MTT法检测转染后CD133~+PANC-1细胞增殖能力;应用软琼脂集落形成实验检测转染后CD133~+PANC-1细胞克隆形成能力;应用细胞迁移实验检测转染后CD133~+PANC-1细胞迁移能力的变化。结果:本实验应用FCM法成功地从PANC-1细胞中分选出CD133~+PANC-1细胞亚群和CD133~-PANC-1细胞亚群,CD133~+PANC-1细胞亚群在裸鼠皮下成瘤体积明显大于同期CD133~-PANC-1细胞亚群[(343.05±57.59)mm~3 vs(176.86±32.58)mm~3,P<0.01],瘤体质量亦明显大于同期CD133~-PANC-1细胞亚群[(4.13±0.37)g vs(1.07±0.21)g,P<0.01],表明CD133~+PANC-1细胞具有明显肿瘤干细胞特性。细胞周期实验证实,CD133~+PANC-1组细胞处于G0/G1期比例显著高于CD133~-PANC-1细胞[(65.34±3.25)%vs(56.56±4.87)%,P<0.01],符合干细胞周期分布特点。RT-qPCR及WB检测结果显示,CD133~+PANC-1细胞亚群中GPSM2 mRNA及蛋白表达量明显高于CD133~-PANC-1细胞亚群。本实验利用RNAi技术成功构建了针对GPSM2基因的shRNA慢病毒载体,并感染CD133~+PANC-1细胞亚群获得GPSM2-shNRA稳转细胞株。RT-qPCR及WB结果表明,GPSM2-shNRA稳转细胞株中GPSM2 mRNA及蛋白表达水平显著下调(均P<0.05)。与空白对照组(Blank组)及稳转对照组(shNC组)比较,稳转GPSM2shRNA组(shGPSM2组)的CD133~+PANC-1细胞亚群增殖能力和克隆形成能力降低(P<0.05),迁移能力下降(P<0.05)。结论:CD133~+PANC-1细胞具有明显肿瘤干细胞特性;CD133~+PANC-1细胞中GPSM2表达水平较CD133~-PANC-1细胞显著上调,下调GPSM2表达可显著降低CD133~+PANC-1细胞增殖和侵袭能力。综上所述,GPSM2可能成为调控PCSCs的重要靶点。