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目的:通过鉴定小鼠睾丸、附睾和前列腺组织细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)的蛋白,明确睾丸、附睾和前列腺来源的细胞外囊泡的蛋白组分在精子发育成熟及功能维持方面所发挥的不同作用。方法:使用TEI(Total Exosome Isolation)方法分别富集小鼠睾丸、附睾和前列腺组织的EVs,用免疫印迹分析EVs标记蛋白的表达,在透射电镜下观察EVs形态,用动态光散射粒径分析仪(dynamic light scattering,DLS)分析颗粒大小分布。通过液相色谱串联质谱法(LC MS/MS)分析三种EVs的蛋白组分。运用DAVID 6.8在线分析工具从细胞组分、分子功能和生物学过程三方面对小鼠睾丸、附睾和前列腺组织的EVs蛋白进行GO(gene ontology)富集分析。结果:1.免疫印迹分析富集到的EVs表达CD63、TSG101等细胞外囊泡标记物。在透射电镜下观察EVs多呈圆形杯状,用动态光散射粒径分析仪(dynamic light scattering,DLS)分析颗粒大小分布,发现睾丸组织来源的EVs分布范围较大(13-450nm),以30-140nm居多;附睾组织EVs直径大小分布在13-24nm、24-50nm、50-250nm三个区段;前列腺组织EVs分布在7-28nm、28-68nm和68-220nm三个区段。2.本实验筛选到1148种睾丸组织EVs蛋白,902种附睾组织EVs蛋白和651种前列腺组织EVs蛋白。其中睾丸、附睾和前列腺组织EVs共有的蛋白277种,睾丸组织EVs特有的蛋白667种,附睾组织EVs特有的蛋白311种,前列腺组织EVs特有蛋白142种。3.DAVID 6.8在线分析工具GO富集分析发现:三者共有的蛋白主要发挥蛋白质结合、RNA结合和核酸结合等分子功能,参与蛋白质翻译和运输等生物学过程。三者特异性蛋白结果分析显示,睾丸组织EVs蛋白主要参与精子发生,DNA损伤应答及修复等生物学过程;附睾组织EVs蛋白主要参与转运、代谢和免疫作用等;前列腺组织EVs蛋白主要参与代谢活动等。结论:睾丸、附睾和前列腺组织EVs蛋白参与多种生物学过程,在精子发生及睾丸后精子成熟及功能维持中发挥一定的作用。