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研究背景:食管鳞状细胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）是世界上最常见的严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一,发病有明显的地域差异和组织学类型差异,与人种、遗传、地理位置和饮食习惯等息息相关。目前食管切除术主要针对早期局限未发生侵润及远处转移的ESCC病例,但经常发生复发,预后不良;对于晚期患者,全身化学疗法和放射疗法的多模态疗法也只能带来有限的临床益处。目前尚无针对晚期转移侵润患者的分子靶向疗法。近年来,尽管ESCC诊断及治疗已有所进展,但是由于缺乏特异性和敏感性较好的早期肿瘤诊断标志物,临床上诊断ESCC时,患者往往已处于晚期。因此,筛选出更多有效的诊断、预后靶向肿瘤标志物和治疗靶点已成为目前ESCC基础研究和临床研究的主要方向。人类全基因组测序时新发现的一种非常保守的长链非编码RNA命名为睾丸相关的高度保守的致癌长链非编码RNA(（Testis-associated highly-conserved oncogenic long non-coding RNA,THOR 或 THORLNC）,THOR定位在2号染色体,基因全长631bp,由3个外显子组成,最初发现在睾丸组织中特异性表达,现研究证实也广泛存在人类多种肿瘤组织中,其高表达可显著地促进恶性肿瘤的发生和发展。并且THOR能够与胰岛素样生长因子 2mRNA 结合蛋白 1（Insulin-like growth factor 2 mRNA binding protein 1,IGF2BP1）相互作用,促进多种人类肿瘤的发生和发展。本课题研究了 THOR在食管鳞状细胞癌中的表达情况,并探究了其促进增殖、克隆、迁移等一系列细胞生物学功能的机制,为未来研究新型的食管癌诊断和治疗的靶标开拓了新的视野。研究目的:1.UALCAN数据库分析THOR与食管癌病理特征的关联,探究THOR与食管癌的相关性;2.探究THOR在ESCC中的表达情况,并分析THOR与患者病理信息的相关性;3.利用siRNA在ESCC中敲减THOR,探究THOR在促进ESCC发生、发展中可能存在的作用及分子机制。以期为未来研究新型的食管癌诊断、预后评估和治疗的靶标开拓新的视野。研究方法:1.利用UALCAN数据库分析THOR在食管癌中的的表达情况,同时分析THOR与食管癌的样本类型、种族、性别、种族、体重、吸烟、肿瘤分期、肿瘤分级、肿瘤亚型等病理特征的相关性。2.收集川北医学院胸外科2018-2019年经临床诊断的的37例ESCC患者的组织标本,采用qRT-PCR定量检测37对ESCC癌组织及配对的癌旁正常食管上皮组织中THOR的表达水平,并分析THOR的表达水平与患者临床病理信息的相关性。3.体外培养正常食管上皮细胞株HET-1A以及ESCC细胞株TE1,EC109,KYSE150,采用qRT-PCR定量检测THOR的表达情况,筛选THOR高表达细胞株作为实验对象进行后续细胞功能学研究。4.针对THOR显著高表达的ESCC细胞株TE1,通过siRNA在两个位点（si-THOR-1,si-THOR-2）敲降THOR的表达,并通过CCK-8试验、平板克隆形成试验、划痕试验、细胞周期实验检测敲降THOR表达后对TE1的增殖、克隆、迁移、细胞周期等细胞学行为的影响。5.针对THOR显著高表达的ESCC细胞株TE1,通过siRNA在两个位点（si-THOR-1,si-THOR-2）敲降 THOR 的表达后,利用 qRT-PCR 和Western blot分别检测靶基因IGF2BP1其依赖基因GLI-1、MYC mRNA及蛋白质的表达情况。研究结果:1.UALCAN数据库在线分析结果显示:THOR在EC患者的表达显著高于正常人,肿瘤分期为Ⅱ和Ⅲ期,种族为高加索人和亚洲人,年龄段为40-80岁,肿瘤分级为Ⅱ和Ⅲ级的食管腺癌（Esophageal adenocarcinoma,EAC）和ESCC男性患者也显著高表达。2.通过qRT-PCR检测了 37对ESCC患者癌组织/癌旁组织中THOR的表达情况,发现ESCC癌组织中THOR表达水平对比癌旁正常食管上皮组织显著升高,差异有统计学意义（P＜0.01）。同时分析THOR与患者临床病理的相关性,发现THOR与年龄、性别、TNM分期显著相关,与肿瘤位置、分化级别、肿瘤直径、淋巴结转移无关。结果与UALCAN的数据一致都印证THOR在ESCC中高表达,暗示THOR可能是ESCC的促癌基因。THOR在ESCC的发生、发展中可能发挥着重要作用。3.本研究通过对ESCC细胞株TE1,EC109,KYSE150及正常食管上皮细胞株HET-1A中THOR的检测,发现TE1、EC109中THOR表达水平明显高于正常食管上皮细胞株HET-1A。其中TE1明显高表达THOR,可以作为实验对象进一步研究细胞生物学功能。4.在细胞株TE1中,靶向siRNA在两个位点（si-THOR-1,si-THOR-2）敲降THOR后,与无意义转染对照组（si-NC）相比,THOR明显降低（P＜0.01）。siRNA-THOR-1 和 siRNA-THOR-2 转染 TE1 细胞后,通过 CCK8实验结果证实实验组的细胞增殖受到抑制。平板克隆形成试验显示,与无意义对照组（si-NC）相比,实验组（siRNA-THOR-1和siRNA-THOR-2）细胞克隆形成能力明显减弱。划痕实验显示,与无意义对照组（si-NC）相比,2个靶点（si-THOR-1、si-THOR-2）进行转染的TE1细胞在12、24、48h几个时间位点均表现为迁移能力明显受到抑制。流式仪检测细胞周期提示,两实验组（si-THOR-1和si-THOR-2）细胞发生了明显的G1期阻滞。5.在细胞株TE1中,靶向siRNA在两个位点（si-THOR-1,si-THOR-2）敲降THOR后,与无意义转染对照组（si-NC）相比,qRT-PCR及Western blot结果显示,IGF2BP1及其依赖基因GLI-1、MYC mRNA及蛋白质的表达均明显下调（P＜0.05）。研究结论:THOR在ESCC组织及细胞中都表现为明显上调,敲降THOR在ESCC细胞株TE1中的表达后,TE1的增殖、克隆、迁移、细胞周期等生物学特性明显受到抑制。其分子机制可能是通过介导靶基因IGF2BP1及其依赖基因GLI-1、MYC的表达从而促进肿瘤细胞增殖、克隆形成、迁移及细胞周期。为今后更好诊断、治疗ESCC寻找潜在高效的分子靶标开辟了新的视野。