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儿茶素类物质(原花青素单体)是茶叶的主要活性成分之一,其含量多少和结构类型直接影响茶叶品质及保健功效。黄金茶是湖南湘西特有、珍稀和优质的茶树资源,具有广阔的市场开发潜力。目前有关黄金茶中原花青素类次生代谢物的研究涉及甚少,关于其生物合成机理的研究仍是空白。本研究以黄金茶1号和2号品系为实验材料,研究内容和结果如下:(1)采用有机溶剂萃取法提取春、夏和秋季黄金茶不同发育时期鲜叶中原花青素,利用HPLC同时测定儿茶素(C)、表儿茶素(EC)、没食子儿茶素(GC)、表没食子儿茶素(EGC)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的含量,并分析其分布规律。结果表明,夏季各原花青素单体含量最高,春季最低,即夏季>秋季>春季;从组成分布和变化规律来看,春季叶片中,EGC和EGCG含量相对较高,其他单体含量较低;各单体含量均随着叶片发育先上升然后下降。夏季叶片中,EGC和C相对较高;各单体含量也随叶片发育先升高再降低;秋季叶片中,EC和EGCG含量相对较高;各原花青素含量也表现出先上升后下降的趋势。两个品系在儿茶素类物质的生物积累和变化方面无显著差别。(2)采用RT-PCR法从黄金茶幼嫩叶片中分离无色花青素还原酶基因(LAR)花青素还原酶基因(ANR),克隆至T载体进行测序和生物信息学分析。成功获得了CsLAR和CsANR基因,序列分析表明两基因全长为1044bp和1029bp,预测分别编码347aa和342aa的蛋白质,生物信息学分析发现两基因编码蛋白理化性质和三维结构基本与其对应的无色花青素还原酶家族和花青素还原酶家族蛋白特征一致。(3)以β-actin为内参基因,通过实时定量PCR研究了CsANR、CsLAR在不同季节、不同发育时期黄金茶叶片中的表达模式,分析原花青素4种相关单体(C和GC、EC和EGC)分布与CsLAR、CsANR表达水平的关系。结果显示,在春季和秋季,CsANR、CsLAR表达量与原花青素各单体含量变化趋势一致。在夏季,黄金茶1号鲜叶中CsANR表达量与对应原花青素单体(EC和EGC)含量变化趋势一致,CsLAR表达量与对应原花青素单体无相关性;黄金茶2号鲜叶中CsLAR表达量与对应原花青素单体(C和GC)含量变化趋势一致,CsANR表达水平与对应原花青素单体含量无相关性。总体而言,在春季,黄金茶鲜叶中CsANR与CsLAR的表达量基本一致,夏、秋季黄金茶鲜叶中CsLAR的表达量要高于CsANR的表达量。实验结果证明,EGC和EGCG是黄金茶1号和2号品系中儿茶素类活性物质的主要成分;茶叶中原花青素单体总量随季节和发育时期均呈现先升高而后逐渐降低的变化规律。黄金茶中儿茶素类物质的生物合成有LAR和ANR两条途径。