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由于受到地球自转的影响,地球上的生物为了适应地球昼夜节律的变化而表现出以24小时为周期的节律变化(circadian rhythm)。生物节律使生物体的生理生化过程能更好地适应环境的变化,从而提高其生存概率。在植物基因组中,大约有10%的功能基因受到生物节律的调控。参与生物节律调控的基因又分为中央振荡器(central oscillator)和从动振荡器(slave oscillator)。从动振荡器基因的表达受到中央振荡器基因的控制,但从动振荡器又能调控器下游的下游基因的表达和节律变化。AtGRP7蛋白是拟南芥的一个富含甘氨酸的RNA结合蛋白,其表达受到自我反馈调控,参与局部的生物节律的控制,是一个从动振荡器基因。AtGRP7基因与拟南芥的冷胁迫应答和花期调节有关,也参与植物免疫应答的激活。但到目前为止,AtGRP7作用的分子机理还不清楚,与AtGRP7发生互作的蛋白也未被鉴定。本研究为了研究AtGRP7的互作蛋白,首先构建了AtGRP7的酵母双杂交诱饵载体。诱饵载体自激活和毒性检测的实验表明,AtGRP7无自激活性且对酵母菌无毒害作用。在酵母双杂之前,我们首先对拟南芥酵母表达文库进行滴度测定,滴度结果表明拟南芥文库酵母浓度为1.45×107/ml。将携带诱饵载体的Y2Hgold酵母菌株与拟南芥cDNA文库的Y187菌株进行杂交,通过营养缺陷筛选获得发生蛋白互作的菌株。将筛选得到的菌株提取质粒,然后与诱饵载体的进行共转复筛,从而验证5个菌株为阳性克隆。最后经过测序和Blantx分析,发现AtGRP7的互作蛋白中有一个是编码核糖体蛋白的基因,一个是编码类似糖类结合蛋白的基因,还有一个编码假定的木酮糖激酶的基因,还有几个功能未知的基因。这些互作还需要用其他方法进行验证。本研究为筛选鉴定AtGRP7的互作蛋白以及揭示AtGRP7的分子作用机理打下了良好基础。