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大口黑鲈(Micropterus salmoides),俗称加州鲈,隶属鲈形目,原产于北美洲,是一种典型的肉食性鱼类。由于生长速度快,肉质鲜美及较高的市场价值,现已成为我国重要的养殖品种之一。然而,随着养殖密度的不断提高及养殖环境的不断恶化,导致多种疾病爆发。为了解决病害问题,抗生素和多种药物被大量应用在水产养殖业中,虽然抗生素和药物可以减少病害发生,但是抗生素和药物的滥用会导致残留超标和耐药性增加,加之减抗和禁抗是现代水产养殖业发展的主题。因此,有必要开发安全可靠的疾病预防措施,减轻疾病发生,促进大口黑鲈养殖业的可持续发展。β-葡聚糖作为一种高效、安全、无毒副作用的免疫调节物质,对水产动物的生长性能、抗氧化、免疫力及抗感染能力具有良好的促进作用。本实验拟以大口黑鲈为研究对象,以β-葡聚糖为免疫调节因子,探究其对大口黑鲈生长性能、非特异性免疫、糖脂代谢及肠道微生物组成的影响,借助转录组测序技术解析β-葡聚糖提高免疫力的可能机制。本论文主要包括以下三个方面的内容:1.β-葡聚糖对大口黑鲈生长、血清生化、肝脏组织结构及抗感染能力的影响在基础饲料(~53%蛋白,~15%脂肪)中分别添加0(Control)、100(LA-100)、200(MA-200)、300(HA-300)mg/kg的β-葡聚糖,每种饲料设置3个平行,每缸包含50尾大口黑鲈(初始体重79.30±0.50g),进行为期70天的养殖实验。养殖实验结束后,进行为期3天的攻毒实验。实验结果表明,饲料中添加不同水平的β-葡聚糖对大口黑鲈生长性能、形体指标及全鱼体成分没有显著影响。饲料中添加300mg/kg的β-葡聚糖能够改善大口黑鲈肝脏组织结构,缓解肝脏脂肪和肝糖原蓄积。随着β-葡聚糖添加水平的增加,大口黑鲈血清中溶菌酶活性显著提高。养殖实验结束后,每缸选取25尾大口黑鲈进行舒伯特气单胞菌(Aeromonas schubertii)攻毒实验,结果表明,对照组中的大口黑鲈在12h内全部死亡,LA-100组在48h内全部死亡,HA-300组在60h内全部死亡,MA-200组在60h后有1尾鱼存活,表明饲料中添加β-葡聚糖能够提高大口黑鲈对舒伯特气单胞菌的抵抗能力。2.β-葡聚糖对大口黑鲈肠道微生物组成的影响采用16S r RNA基因测序技术对Control和HA-300组的大口黑鲈肠道微生物多样性进行分析,探究β-葡聚糖对大口黑鲈肠道微生态的影响。结果表明,大口黑鲈肠道中的优势菌群为梭杆菌门(Fusobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria)。饲料中添加β-葡聚糖对α多样性指数没有显著影响。β-葡聚糖能够提高大口黑鲈肠道中厚壁菌门相对丰度、降低变形菌门相对丰度。LEf Se分析结果显示,β-葡聚糖能够提高支原体(Mycoplasma)等有益菌的相对丰度,降低变形菌门(Proteobacteria)、γ-变形菌纲(Gammaproteobacteria)大肠志贺氏杆菌(EscherichiaShigella)、大肠杆菌(Escherichia coli)和炭疽杆菌(Bacillus anthracis)等有害菌的相对丰度(LDA>2),从而改善肠道微生态环境,维持肠道免疫功能。3.基于转录组学分析大口黑鲈对β-葡聚糖的响应本部分实验选取Control组和HA-300组,借助转录组测序技术,以期筛选出更多的调控因子和代谢通路,解析大口黑鲈对β-葡聚糖的响应机制。肝脏转录组测序结果显示,组装并去冗余后得到22602条Unigene。经筛选后得到1245个差异表达基因(|log2fold change|≥1,q-value≤0.05),其中包含449个显著上调及796个显著下调的差异表达基因(DEGs)。选取免疫及糖脂代谢相关基因进行KEGG富集分析(q<0.05)发现,与免疫相关的代谢通路共有20条,与糖脂代谢相关的代谢通路有21条。筛选出与免疫相关的关键DEGs 9个,与糖脂代谢相关的关键DEGs 12个,β-葡聚糖可以通过上调p21蛋白(Cdc42/Rac)激活激酶1(pak1)、丝裂原活化蛋白激酶激酶7(map2k7),下调抑制素β1(arrb1)、白细胞介素1β(il1β)、白细胞介素10(il10)和Toll样受体9(tlr9)等基因的表达水平,降低大口黑鲈炎症反应,提高免疫力。同样,β-葡聚糖可以通过上调谷氨酸-氨连接酶(谷氨酰胺合成酶)b(glulb)、异柠檬酸脱氢酶(NAD(+))3催化亚基α(idh3a),下调磷酸葡萄糖变位酶3(pgm3)、葡萄糖激酶(己糖激酶4)(gck)、二氢硫辛酰胺S-乙酰转移酶(丙酮酸脱氢酶E2复合物)(dlat)等基因表达水平。此外,还可以通过下调单酰基甘油O-酰基转移酶(mogat2)、脂肪酸合酶(fasn)、酰基辅酶A长链家族合成酶4a(acsl4a)、乙酰辅酶A羧化酶α(acaca)和硬脂酰辅酶A去饱和酶(delta-9-desaturase)(scd)、肉碱棕榈酰基转移酶1B(cpt1b)和肝脏脂肪酶(lipca)等基因表达水平,调控糖脂代谢。