猪星状病毒（Porcine Astrovirus,PoAstV）是一种可以引发猪病毒性腹泻的单股正链RNA病毒,目前已发现的基因型共有五种（PoAstV 1-5）,在我国分布广泛。不同基因型之间差异较大,其基因组序列同源性仅有40%左右。此前对PoAstV的检测以逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）之类的方法为主,但这些方法只检测病毒抗原。目前关于星状病毒衣壳蛋白的研究主要集中于人类星状病毒（Human Astrovirus,HAstV）,对于PoAstV抗原蛋白的研究较少。本研究利用原核表达系统表达了PoAstV的衣壳蛋白并建立起ELISA方法对PoAstV进行了血清学检测;同时利用表达的蛋白免疫小鼠确定免疫原性最佳的抗原蛋白。本研究建立了快速灵敏检测PoAstV2、3和5型抗体的检测体系,具体结果如下:1.根据HAstV衣壳蛋白的三个结构域Inner,Outer,Spike,预测并表达,PoAstV衣壳蛋白的相同区域。分别以本实验室国内检测到的PoAstV 2、PoAstV 5以及已发表的PoAstV 3（NC₀19494）毒株为模板,设计相应的表达引物,扩增编码PoAstV 2衣壳蛋白三个结构域的片段,分别连接至pCold-TF原核表达载体,同时,扩增PoAstV 3和PoAstV 5的衣壳蛋白的3个片段连接至pHUE原核表达载体,表达相应重组蛋白并纯化,通过Western Blot鉴定,确定表达的蛋白为所需目的蛋白。2.利用目的蛋白免疫小鼠获得含有多克隆抗体的阳性血清,经ELISA检测各蛋白免疫小鼠血清效价并确定Spike蛋白的抗原性最强,因此将Spike蛋白确立为间接法检测PoAstV抗体的包被抗原蛋白。通过预试验确定了最佳反应条件:最佳包被抗原稀释浓度为2.5 ng/孔;最佳样品血清稀释度为1:100;最佳山羊抗猪酶标二抗稀释度为1:10000;最佳底物显色时间为12 min。确定了PoAstV 2,PoAstV 3和PoAstV 5的S/P cut-off值分别为42.9,31.07和29.85。经重复试验进一步验证同批次或不同批次酶标板变异系数均小于15%,证实PoAstV-ELISA法有较好的稳定性。随后采用构建好的ELISA血清学检测方法检测来自湖南省及江西省六个不同县的养猪场的272份血清样品。发现PoAstV 2阳性率为35.66%,PoAstV 3阳性率为44.12%,而PoAstV 5阳性率仅为2.94%,表明不同基因型的PoAstV其流行趋势有很大的不同。通过本研究表明本实验表达的PoAstV 2-Spike,PoAstV 3-Spike和PoAstV 5-Spike蛋白具有较好的抗原性,本实验建立的ELISA检测体系具有良好稳定性的,可为今后PoAstV的检测提供一种新的血清学方法,也为PoAstV衣壳蛋白研究的提供新的数据。