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目的:研究LigaseⅣ对小鼠生长及成体神经系统发育的影响,进一步了解LigaseⅣ在小鼠神经系统发育中的重要性。
方法:记录野生型(WT)和突变型LigaseⅣY288C纯合子(MU)小鼠的生存情况,绘制小鼠生存曲线;记录小鼠不同生长时期的体质量和脑质量,监测小鼠个体发育和脑发育差异;用Sox2和Nestin免疫染色来检测小鼠侧脑室下区(SVZ)神经干细胞的数量;用Ki67和Nestin免疫染色来检测小鼠SVZ神经干细胞的增殖情况;用γH2AX和Nestin免疫染色来检测小鼠SVZ神经干细胞的损伤情况;原代分离培养小鼠SVZ神经干细胞,用同样的标记物对分离的神经干细胞作细胞免疫荧光染色来验证我们的体内实验的结果;用克隆形成实验检测细胞的生长状况;体外培养神经干细胞看其自分化能力;用Tunnel免疫染色来检测神经干细胞的凋亡情况。
结果:MU小鼠的平均寿命是4.5月,明显低于WT小鼠;MU小鼠的体质量和脑质量在生长的各个时期都明显小于WT小鼠;体内研究显示,MU小鼠大脑SVZ的神经干细胞数量及增殖细胞数量都少于WT小鼠;MU小鼠大脑SVZ神经干细胞DNA损伤更严重;体外研究显示,MU小鼠神经干细胞增殖能力低于WT小鼠,神经干细胞的损伤程度高于WT小鼠,体内体外结果一致。MU小鼠神经干细胞的克隆形成能力低于WT小鼠,分化能力也要低于WT小鼠,细胞凋亡的程度高于WT小鼠。
结论:NHEJ修复途径中LigaseⅣ的突变会导致细胞DNA损伤修复突变,DNA损伤的积累造成细胞周期停滞、增殖能力下降、凋亡增加,从而导致成体神经再生能力降低,说明LigaseⅣ在小鼠生长及成体神经系统发育的过程中起重要作用。
方法:记录野生型(WT)和突变型LigaseⅣY288C纯合子(MU)小鼠的生存情况,绘制小鼠生存曲线;记录小鼠不同生长时期的体质量和脑质量,监测小鼠个体发育和脑发育差异;用Sox2和Nestin免疫染色来检测小鼠侧脑室下区(SVZ)神经干细胞的数量;用Ki67和Nestin免疫染色来检测小鼠SVZ神经干细胞的增殖情况;用γH2AX和Nestin免疫染色来检测小鼠SVZ神经干细胞的损伤情况;原代分离培养小鼠SVZ神经干细胞,用同样的标记物对分离的神经干细胞作细胞免疫荧光染色来验证我们的体内实验的结果;用克隆形成实验检测细胞的生长状况;体外培养神经干细胞看其自分化能力;用Tunnel免疫染色来检测神经干细胞的凋亡情况。
结果:MU小鼠的平均寿命是4.5月,明显低于WT小鼠;MU小鼠的体质量和脑质量在生长的各个时期都明显小于WT小鼠;体内研究显示,MU小鼠大脑SVZ的神经干细胞数量及增殖细胞数量都少于WT小鼠;MU小鼠大脑SVZ神经干细胞DNA损伤更严重;体外研究显示,MU小鼠神经干细胞增殖能力低于WT小鼠,神经干细胞的损伤程度高于WT小鼠,体内体外结果一致。MU小鼠神经干细胞的克隆形成能力低于WT小鼠,分化能力也要低于WT小鼠,细胞凋亡的程度高于WT小鼠。
结论:NHEJ修复途径中LigaseⅣ的突变会导致细胞DNA损伤修复突变,DNA损伤的积累造成细胞周期停滞、增殖能力下降、凋亡增加,从而导致成体神经再生能力降低,说明LigaseⅣ在小鼠生长及成体神经系统发育的过程中起重要作用。