目的:观察重组人釉原蛋白（recombinant human amelogenin,rhAm）对人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts,hGFs）生物学特性及炎症因子表达的影响,为rhAm在牙周治疗中的临床应用提供实验数据。方法:收集因正畸需要行龈切术切下的牙龈组织,要求无牙周炎症,患者知情同意后,收集牙龈,体外培养hGFs。课题组已在前期研究中通过BL21/p ET28a-His-SUMO-rhAm表达系统,在适宜的条件下,经诱导表达和酶切纯化,得到25 k Da重组全长Am（rhAm）。第一部分:取P4hGFs,分5组:C组:对照组（hGFs未处理组）;T1组:5μg/m L rhAm;T2组:10μg/m L rhAm;T3组:20μg/m L rhAm;T4组:40μg/m L rhAm。各组细胞经如上分组处理,培养1/3/5d采用细胞计数试剂盒8（cell counting kit8,CCK8）检测OD450,研究rhAm对hGFs增殖的影响;培养15/30/45/60min采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT）法观察rhAm对hGFs黏附的影响;培养0/12/24/36/48/60h后,划痕实验观察rhAm对hGFs迁移的影响。第二部分:取P4hGFs,分3组:对照组（hGFs未处理组）;实验1组（1μg/m L P.gingivalis LPS）;实验2组（20μg/m L rhAm+1μg/m L P.gingivalis LPS）。各组细胞经如上分组处理,培养1/3/5天后,采用实时聚合酶链反应（polymerase chain reaction,real-time PCR）检测rhAm对hGFs炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8基因表达的影响;采用酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测rhAm对hGFs炎症因子IL-1β和IL-8蛋白表达的影响。采用SPSS22.0软件包对第一及第二部分实验数据进行统计学分析。结果:第一部分:1、CCK8检测OD450的结果显示,在rhAm刺激hGFs后的第一天及第三天,仅20μg/m L和40μg/m L的rhAm可上调细胞增殖（p﹤0.05）,在rhAm刺激hGFs的第五天,各浓度组均能上调细胞增殖（p﹤0.05）,且呈浓度相关性。2、rhAm对hGFs黏附有抑制作用,在15和30分钟,仅最高浓度40μg/m L的rhAm可显著抑制细胞黏附（p＜0.05）;在45分钟时,10μg/m L、20μg/m L及40μg/m L组都出现了对细胞黏附的抑制（p＜0.05）;在60分钟时,所有蛋白浓度组均表现出对hGFs黏附的抑制作用（p＜0.05）,且该抑制作用呈现浓度相关,随着rhAm浓度的增加,抑制黏附的作用也增强。3、划痕实验结果显示,在12h和36h时,40μg/m L组的rhAm的抑制了hGFs的迁移（p＜0.05）,其余各组与对照组相比没有统计学差异;在24h和48h时,各浓度组的rhAm均能抑制hGFs的迁移（p＜0.05）;在60h时,各浓度组rhAm均已全部修复划痕区域。第二部分:1、1μg/m L的P.gingivalis脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）能显著上调hGFs中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、IL-8基因的表达。其中,1μg/m L P.gingivalis LPS刺激后,IL-8表达上调2.6倍,IL-1β表达上调18.5倍,TNF-α表达上2.4倍,上述结果均具有统计学差异（p﹤0.05）。而在20μg/m L rhAm预处理的实验组,以上三种炎症因子都有不同程度的下调,结果具有统计学差异（p﹤0.05）。2、ELISA结果显示,P.gingivalis LPS（1μg/m L）刺激hGFs后4小时,所收集的培养液上清中的IL-1β和IL-8的浓度都显著升高（p﹤0.05）。而20μg/m L的rhAm预处理后,能够下调P.gingivalis LPS诱导hGFs分泌的IL-1β和IL-8蛋白,结果具有统计学差异（p﹤0.05）。结论:rhAm能促进hGFs的增殖,但是抑制其黏附和迁移。同时20μg/m L的rhAm对hGFs表现出明显的抗炎活性,提示其除了在牙周再生领域的作用之外也有抗炎潜能,这种抗炎性能可能是rhAm促进组织再生的机制之一。