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鸡主要组织相容性复合体(Major histocompatablity complex, MHC)是鸡的免疫遗传相关基因,与疾病抗性或易感性有关,且与经呼吸系统感染的鸡恶性淋巴组织增生性疾病马立克氏病(Marek’s disease, MD)尤为密切。MD抗性鸡和易感鸡感染MDV(Marek’s disease virus, MDV)后,细胞因子的转录水平有所不同。为研究细胞因子的基础转录水平,本试验以5种MHC-B单倍型无特定病原体(SPF)鸡群G1、G2、G3、G5和G7为试验对象,利用双重荧光定量RT-PCR(dqRT-PCR)技术对肺组织(气管)、胸腺、法氏囊、脾脏和外周血淋巴细胞(PBL)中Th1型(IFN-γ、IL-18)和Th2型(IL-4、IL-10)细胞因子的mRNA含量进行了定量检测。结果显示,各组织中IL-18的转录水平最高,IL-4最低,IL-10和IFN-γ介于其间。70日龄时,IFN-γ和IL-4在各鸡群的胸腺中转录水平最高,IL-18和IL-10在法氏囊中最高,Th2型细胞因子在脾脏中最低。同时,初级免疫器官(胸腺、法氏囊)中IFN-γ和IL-10转录水平在MD抗性鸡群(G3系)中最高;肺组织、胸腺和脾脏中IL-18以及肺组织和法氏囊中的IL-4在MD易感鸡群(G7系)中最高,肺组织和PBL中IFN-γ在易感鸡中最低。不同组织中IL-4受日龄的调节不同,脾脏和PBL中IL-4在孵化后早期聚集较多,胸腺中70 d高于35 d,而肺脏在35 d时较高。PBL中IL-18在56 d达到高峰。不同单倍型鸡群法氏囊中细胞因子受日龄的调节不同。70 d时G2鸡群法氏囊中IFN-γ、IL-18和IL-10 mRNA含量高于35 d,而G5鸡群无明显变化(IL-18),甚至所下降(IFN-γ、IL-10)。随日龄增长(14 d~35 d),脾脏中IFN-γ转录水平升高,PBL中IL-18和IL-10下降。以上结果表明,不同功能的细胞因子转录水平不同,且在组织中的分布存在差异;初级免疫器官中,Th1型和Th2型细胞因子相互制衡;不同MHC单倍型鸡中细胞因子转录水平有所差异,且受日龄调节。为研究MD感染早期,细胞因子在第一道防线—肺脏和重要靶器官—脾脏中的转录水平,本试验对14日龄的G2系和G5系SPF雏鸡滴鼻接种MDV Md5细胞结合型病毒,利用dqRT-PCR方法对感染后4 h、24 h、48 h和4 d肺组织(气管)、脾脏和PBL中病毒及IFN-γ、IL-18、IL-4和IL-10的mRNA含量进行了定量检测。结果表明,4 dpi两鸡群肺脏和脾脏中均出现了MDV的转录,且肺脏中病毒转录水平高于脾脏,但尚未发生病毒血症。此时,两鸡群肺组织和脾脏中IFN-γ、IL-4和IL-10转录水平大幅度上调,且G2鸡群肺组织和脾脏中IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-18的mRNA含量均高于G5。此外,G2鸡群肺脏中病毒转录水平高于G5,但脾脏中低于G5,可能是G5鸡群肺脏中的病毒比G2更早进入了脾脏中进行增殖,结合病毒检测结果和细胞因子转录水平我们推测G5系较G2系对MD易感。为能从蛋白水平研究细胞因子的分泌情况,本试验克隆并表达了鸡IL-4,利用重组蛋白免疫新西兰大白兔,大量制备了鸡IL-4多抗。以β-actin蛋白为内参,对G2、G3和G7鸡群肺组织中的IL-4蛋白含量进行了Western-blotting检测,并利用ImageQuant 5.2软件进行比较分析。结果显示,各鸡群IL-4蛋白与mRNA比较结果一致,说明该方法可用于鸡IL-4蛋白水平的半定量检测。本研究为多种免疫相关组织中细胞因子的研究提供了一定依据;在模拟MDV自然感染途径下,对早期病毒及细胞因子的检测为研究MD的致病作用提供了参考;建立的鸡IL-4蛋白分子半定量检测方法为从表达水平研究细胞因子提供了借鉴。