【摘 要】
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多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）是导致动物巴氏杆菌病的重要病原菌,在全球范围内广泛存在,无宿主特异性,可导致宿主产生包括猪肺疫、禽霍乱、猪萎缩性鼻炎、兔巴氏杆菌病等多种疾病的发生。此外,还能与其他病菌混合感染,是制约现代健康养殖与经济发展的重要因素。传统疫苗免疫谱窄、保护时间短,因此新型疫苗的研发是必要的。1、多杀性巴氏杆菌dot基因的克隆与生物信息学分析为筛选出
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多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）是导致动物巴氏杆菌病的重要病原菌,在全球范围内广泛存在,无宿主特异性,可导致宿主产生包括猪肺疫、禽霍乱、猪萎缩性鼻炎、兔巴氏杆菌病等多种疾病的发生。此外,还能与其他病菌混合感染,是制约现代健康养殖与经济发展的重要因素。传统疫苗免疫谱窄、保护时间短,因此新型疫苗的研发是必要的。1、多杀性巴氏杆菌dot基因的克隆与生物信息学分析为筛选出具有广谱抗Pm的疫苗候选分子,本研究利用PCR技术从血清A型Pm基因组中克隆出dot毒力基因。经生物信息学分析显示,Pm dot基因由729 bp组成,编码242个氨基酸的蛋白质,蛋白理论分子量为27.032 k Da,等电点（p I）为7.86,N端前24个氨基酸为信号肽区,包含一个跨膜区域,存在6个B细胞抗原表位,该编码蛋白在不同血清型Pm之间具有很高的同源性。推断Pm DOT可能具有很好的免疫原性,并诱导交叉免疫保护。2、重组多杀性巴氏杆菌DOT蛋白诱导小鼠产生的免疫保护效果研究将Pm dot克隆至p ET-28a（+）构建重组质粒p ET-Dot。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）中,重组菌经IPTG成功诱导表达出重组蛋白rDOT。经West-blot检测显示良好的免疫原性。取20 g雌性小鼠40只,随机分为5组,每组8只。分别于0、2、4周经皮下免疫:生理盐（生理盐对照组）、弗氏不完全佐剂（佐剂对照组）、10μg rDOT+弗氏不完全佐剂（低剂量组）、30μg rDOT+弗氏不完全佐剂（中剂量组）、50μg rDOT+弗氏不完全佐剂（高剂量组）。ELISA结果显示,第3次免疫接种后相较于对照组（佐剂组与生理盐水组）,实验组小鼠血清Ig G水平均明显升高。于第3次免疫后2周,用5×LD50 Pm对小鼠腹腔注射攻毒,3 d后对照组小鼠全部死亡,低剂量、中剂量、高剂量免疫组小鼠存活率分别为12.5%、50%、62.5%。可见,rDOT蛋白+弗氏不完全佐剂可诱导部分抗Pm攻击感染的免疫保护作用。本研究为进一步研究广谱抗Pm疫苗积累了基础资料。
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