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目的：
基于“治神调形”中医理论，探讨头针疗法通过对BDNF/TrkB/CREB信号通路和PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的调节作用，促进对缺血性PSS大鼠受损脑组织细胞修复和细胞保护作用，进而改善缺血性PSS症状的生物学机制。
方法：
1.实验一：缺血性PSS大鼠模型的确立和验证
采用文献检索和文献计量学统计的方式，通过对中国知网、万方数据知识服务平台、维普网以及Pubmed等主要中英文数据库进行检索，统计中风后肢体痉挛及相关疾病研究的动物实验中造模方法出现的频数，并根据实验中头针干预条件的情况确定恰当的缺血性PSS模型的造模方法。
将60只Sprague Dawley大鼠（SD大鼠）随机分成空白组20只，假手术组20只，模型组20只。对模型组大鼠进行已确立的造模方案造模。造模后于1d、3d、7d、14d记录各组大鼠的死亡只数、痉挛发生只数、改良Ashworth（MAS）评分。
2.实验二：缺血性PSS动物研究头针行针频率及时间验证
将120只SD大鼠，分为空白组10只，假手术组10只，实验组100只，对实验组大鼠进行PSS模型建立。将造模成功大鼠随机平均分到模型组、头针A组（200r/min,3min）、头针B组(200r/min,1min)、头针C组(100r/min,3min)、头针D组(100r/min,1min)，给予相应的治疗7天，并于第7d观察记录Zealonga评分、改良Ashworth评分。
3.实验三：头针对缺血性PSS大鼠行为学改变的影响
以缺血性PSS模型大鼠为研究对象，将60只SD大鼠随机分成假手术组20只，实验组40只。对实验组大鼠进行缺血性PSS模型建立。将造模成功大鼠随机分到模型组和头针组，给予相应的治疗7天，并每2日观察记录Zealonga评分、改良Ashworth评分、平衡木行走实验评分等动物行为学数据。
4.实验四：头针对缺血性PSS大鼠脑组织恢复的影响
7d后对大鼠脑皮质组织进行取材，采用2，3，5—氯化三苯基四氮唑（TTC）染色的方法观察缺血性PSS大鼠脑梗死灶体积变化，采用HE染色和尼氏染色观察缺血损伤病变部位的病理改变及神经元细胞和尼氏小体的变化，采用FITC-葡聚糖脑血管灌注的方法观察脑组织血管状态变化。
5.实验五：头针对缺血性PSS大鼠BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响
对缺血性PSS大鼠损伤的脑皮质运动区组织采用Western Blotting、PCR检测脑皮质中的BDNF、TrkB、CREB、p-CREB的蛋白表达及其mRNA的表达。
6.实验六：头针对缺血性PSS大鼠PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的影响
对缺血性PSS大鼠损伤的脑皮质运动区组织采用Western Blotting、PCR检测脑皮质中的PI3K、Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β的蛋白表达及其mRNA的表达。
结果：
1.实验一：缺血性PSS大鼠模型验证
文献检索结果显示，相关动物实验研究论文发表数量为25例，其中中文18篇、英文7篇。所出现的造模方法主要包括：线栓法MCAO（包括再灌注）、线栓MCAO+内囊注射NMDA法、光栓法三种。其中线栓法MCAO在卒中后肢体痉挛动物研究中应用概率最大（60%），其次为线栓MCAO+内囊注射NMDA法（32%），最后为光栓法（8%）。并且考虑后两者均会造成颅损，因此初步确定线栓法永久性大脑中动脉闭塞（MCAO）为造模方法。
对模型组大鼠进行线栓法MCAO造模，造模后，模型组存活15只，造模过程中死亡5只。空白组与假手术组大鼠14d内均无死亡、痉挛状态出现，且MAS评级为0级。与空白对照组，1d时模型组大鼠死亡1例，痉挛状态出现3例，MAS评分平均水平无显著性差异（P＞0.05）；3d时模型组大鼠死亡3例，痉挛状态出现8例，MAS评分平均水平有显著性差异（P＜0.05）；7d时模型组大鼠死亡4例，痉挛状态出现10例，MAS评分平均水平有显著性差异（P＜0.05）；14d时模型组大鼠死亡7例，痉挛状态出现6例，MAS评分平均水平无显著性差异（P＞0.05）。因此线栓法MCAO可以作为本研究中的动物造模方法。
2.实验二：缺血性PSS动物研究中头针行针频率及时间验证
头针干预7d时，头针B组相较头针A、C、D组Zealonga评分与改良Ashworth评分均有显著性降低（P＜0.05），与1d组相比，头针B组7d后Zealonga评分与改良Ashworth评分显著性（P＞0.05）。因此最终选择200r/min,1min为头针的行针方案。
3.实验三：头针对缺血性PSS大鼠行为学影响与假手术组比较，模型组大鼠Zealonga评分上升，平衡木行走评分下降，说明运动神经功能下降，改良Ashworth评分上升，说明肢体痉挛程度上升（P＜0.05）；
与模型组比较，头针组大鼠Zealonga评分下降，平衡木行走评分上升，说明经头针治疗后运动神经功能提升，改良Ashworth评分下降，说明肢体痉挛程度减小（P＜0.05）。
4.实验四：头针对缺血性PSS大鼠脑组织形态学影响
对比假手术组，模型组缺血性PSS模型大鼠脑组织缺血性梗死灶占比显著性增高（P＜0.05），有明显液化性坏死区域，细胞数量减少，神经元细胞数量减少且排列不规整。与模型组比较，头针组缺血性PSS模型大鼠脑组织缺血性梗死灶占比显著性减小（P＜0.05），无明显病理改变，细胞数量增多，神经元数量及形态正常。
5.实验五：头针对缺血性PSS大鼠BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响
模型组相较假手术组大鼠患侧脑皮质运动区组织中BDNF、TrkB、CREB、p-CREB蛋白表达下降（P＜0.05），BDNF、TrkB、CREB mRNA的表达下降（P＜0.05）；与模型组比较，头针组大鼠BDNF、TrkB、CREB、p-CREB蛋白表达及BDNF、TrkB、CREB相关mRNA的表达上升（P＜0.05）。
6.实验六：头针对缺血性PSS大鼠BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响
模型组相较于假手术组大鼠患侧脑皮质运动区组织中PI3K、Akt、p-Akt、p-GSK-3β表达降低（P＜0.05），GSK-3β表达增高（P＜0.05），PI3K、Akt mRNA的表达下降（P＜0.05）；与模型组比较，头针组大鼠PI3K、Akt、p-Akt、p-GSK-3β表达升高（P＜0.05），GSK-3β表达降低（P＜0.05），PI3K、Akt mRNA的表达升高（P＜0.05）。
结论：
本研究基于“BDNF/TrkB/CREB信号通路及PI3K/Akt/GSK-3β信号通路对脑组织中神经、血管等组织细胞的修复与保护作用，促进损伤的神经与血管网络的改善，进而改善缺血性PSS大鼠的痉挛状态，起到所提出中医康复理论中的‘治神调形’作用”的科学假说，从动物行为学观察、组织病理学、分子生物学三个方面进行分析，得到结论如下：
1.从动物行为学的角度说明了头针具有改善PSS模型大鼠神经功能、肌痉挛程度、运动功能的效用，证明了头针疗法通过调节头部治疗区具有“调形”的治疗作用。
2.从组织学层面说明了头针能有效减小缺血性PSS模型大鼠缺血梗死灶的体积，改善脑组织病理状态，促进上运动神经元细胞形态和数量上的恢复，以及脑血管状态的恢复。结合行为学研究结果证明了头针能通过对病机中提出的“脑损”的治疗，能起到“调形”，也就是促进行为学改善的功效。
3.从分子生物学层面证明了头针能有效提高BDNF、TrkB、CREB等蛋白的表达，上调BDNF/TrkB/CREB信号通路，从而促进BNDF自分泌的良性循环，进而促进BDNF对脑组织细胞的修复作用和细胞保护作用，结合行为学和病理组织学的结论，头针对这一信号通路的影响证明了头针“治神”能改善“髓虚”，进而起到“调形”的功效。
4.证明了头针能激活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路，并可能通过激活该信号通路促进GSK-3β的磷酸化，抑制GSK-3β的促凋亡作用，从而对脑组织细胞起到保护作用，结合上述实验结论，头针可能通过上调BDNF与TrkB的表达，进一步激活的下游PI3K/Akt/GSK-3β信号通路，起到了对“脑损”组织的治疗作用，即“治神”，进而促进了行为学的恢复，即“调形”，从这一角度阐释了“治神”与“调形”的关系。
基于“治神调形”中医理论，探讨头针疗法通过对BDNF/TrkB/CREB信号通路和PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的调节作用，促进对缺血性PSS大鼠受损脑组织细胞修复和细胞保护作用，进而改善缺血性PSS症状的生物学机制。
方法：
1.实验一：缺血性PSS大鼠模型的确立和验证
采用文献检索和文献计量学统计的方式，通过对中国知网、万方数据知识服务平台、维普网以及Pubmed等主要中英文数据库进行检索，统计中风后肢体痉挛及相关疾病研究的动物实验中造模方法出现的频数，并根据实验中头针干预条件的情况确定恰当的缺血性PSS模型的造模方法。
将60只Sprague Dawley大鼠（SD大鼠）随机分成空白组20只，假手术组20只，模型组20只。对模型组大鼠进行已确立的造模方案造模。造模后于1d、3d、7d、14d记录各组大鼠的死亡只数、痉挛发生只数、改良Ashworth（MAS）评分。
2.实验二：缺血性PSS动物研究头针行针频率及时间验证
将120只SD大鼠，分为空白组10只，假手术组10只，实验组100只，对实验组大鼠进行PSS模型建立。将造模成功大鼠随机平均分到模型组、头针A组（200r/min,3min）、头针B组(200r/min,1min)、头针C组(100r/min,3min)、头针D组(100r/min,1min)，给予相应的治疗7天，并于第7d观察记录Zealonga评分、改良Ashworth评分。
3.实验三：头针对缺血性PSS大鼠行为学改变的影响
以缺血性PSS模型大鼠为研究对象，将60只SD大鼠随机分成假手术组20只，实验组40只。对实验组大鼠进行缺血性PSS模型建立。将造模成功大鼠随机分到模型组和头针组，给予相应的治疗7天，并每2日观察记录Zealonga评分、改良Ashworth评分、平衡木行走实验评分等动物行为学数据。
4.实验四：头针对缺血性PSS大鼠脑组织恢复的影响
7d后对大鼠脑皮质组织进行取材，采用2，3，5—氯化三苯基四氮唑（TTC）染色的方法观察缺血性PSS大鼠脑梗死灶体积变化，采用HE染色和尼氏染色观察缺血损伤病变部位的病理改变及神经元细胞和尼氏小体的变化，采用FITC-葡聚糖脑血管灌注的方法观察脑组织血管状态变化。
5.实验五：头针对缺血性PSS大鼠BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响
对缺血性PSS大鼠损伤的脑皮质运动区组织采用Western Blotting、PCR检测脑皮质中的BDNF、TrkB、CREB、p-CREB的蛋白表达及其mRNA的表达。
6.实验六：头针对缺血性PSS大鼠PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的影响
对缺血性PSS大鼠损伤的脑皮质运动区组织采用Western Blotting、PCR检测脑皮质中的PI3K、Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β的蛋白表达及其mRNA的表达。
结果：
1.实验一：缺血性PSS大鼠模型验证
文献检索结果显示，相关动物实验研究论文发表数量为25例，其中中文18篇、英文7篇。所出现的造模方法主要包括：线栓法MCAO（包括再灌注）、线栓MCAO+内囊注射NMDA法、光栓法三种。其中线栓法MCAO在卒中后肢体痉挛动物研究中应用概率最大（60%），其次为线栓MCAO+内囊注射NMDA法（32%），最后为光栓法（8%）。并且考虑后两者均会造成颅损，因此初步确定线栓法永久性大脑中动脉闭塞（MCAO）为造模方法。
对模型组大鼠进行线栓法MCAO造模，造模后，模型组存活15只，造模过程中死亡5只。空白组与假手术组大鼠14d内均无死亡、痉挛状态出现，且MAS评级为0级。与空白对照组，1d时模型组大鼠死亡1例，痉挛状态出现3例，MAS评分平均水平无显著性差异（P＞0.05）；3d时模型组大鼠死亡3例，痉挛状态出现8例，MAS评分平均水平有显著性差异（P＜0.05）；7d时模型组大鼠死亡4例，痉挛状态出现10例，MAS评分平均水平有显著性差异（P＜0.05）；14d时模型组大鼠死亡7例，痉挛状态出现6例，MAS评分平均水平无显著性差异（P＞0.05）。因此线栓法MCAO可以作为本研究中的动物造模方法。
2.实验二：缺血性PSS动物研究中头针行针频率及时间验证
头针干预7d时，头针B组相较头针A、C、D组Zealonga评分与改良Ashworth评分均有显著性降低（P＜0.05），与1d组相比，头针B组7d后Zealonga评分与改良Ashworth评分显著性（P＞0.05）。因此最终选择200r/min,1min为头针的行针方案。
3.实验三：头针对缺血性PSS大鼠行为学影响与假手术组比较，模型组大鼠Zealonga评分上升，平衡木行走评分下降，说明运动神经功能下降，改良Ashworth评分上升，说明肢体痉挛程度上升（P＜0.05）；
与模型组比较，头针组大鼠Zealonga评分下降，平衡木行走评分上升，说明经头针治疗后运动神经功能提升，改良Ashworth评分下降，说明肢体痉挛程度减小（P＜0.05）。
4.实验四：头针对缺血性PSS大鼠脑组织形态学影响
对比假手术组，模型组缺血性PSS模型大鼠脑组织缺血性梗死灶占比显著性增高（P＜0.05），有明显液化性坏死区域，细胞数量减少，神经元细胞数量减少且排列不规整。与模型组比较，头针组缺血性PSS模型大鼠脑组织缺血性梗死灶占比显著性减小（P＜0.05），无明显病理改变，细胞数量增多，神经元数量及形态正常。
5.实验五：头针对缺血性PSS大鼠BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响
模型组相较假手术组大鼠患侧脑皮质运动区组织中BDNF、TrkB、CREB、p-CREB蛋白表达下降（P＜0.05），BDNF、TrkB、CREB mRNA的表达下降（P＜0.05）；与模型组比较，头针组大鼠BDNF、TrkB、CREB、p-CREB蛋白表达及BDNF、TrkB、CREB相关mRNA的表达上升（P＜0.05）。
6.实验六：头针对缺血性PSS大鼠BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响
模型组相较于假手术组大鼠患侧脑皮质运动区组织中PI3K、Akt、p-Akt、p-GSK-3β表达降低（P＜0.05），GSK-3β表达增高（P＜0.05），PI3K、Akt mRNA的表达下降（P＜0.05）；与模型组比较，头针组大鼠PI3K、Akt、p-Akt、p-GSK-3β表达升高（P＜0.05），GSK-3β表达降低（P＜0.05），PI3K、Akt mRNA的表达升高（P＜0.05）。
结论：
本研究基于“BDNF/TrkB/CREB信号通路及PI3K/Akt/GSK-3β信号通路对脑组织中神经、血管等组织细胞的修复与保护作用，促进损伤的神经与血管网络的改善，进而改善缺血性PSS大鼠的痉挛状态，起到所提出中医康复理论中的‘治神调形’作用”的科学假说，从动物行为学观察、组织病理学、分子生物学三个方面进行分析，得到结论如下：
1.从动物行为学的角度说明了头针具有改善PSS模型大鼠神经功能、肌痉挛程度、运动功能的效用，证明了头针疗法通过调节头部治疗区具有“调形”的治疗作用。
2.从组织学层面说明了头针能有效减小缺血性PSS模型大鼠缺血梗死灶的体积，改善脑组织病理状态，促进上运动神经元细胞形态和数量上的恢复，以及脑血管状态的恢复。结合行为学研究结果证明了头针能通过对病机中提出的“脑损”的治疗，能起到“调形”，也就是促进行为学改善的功效。
3.从分子生物学层面证明了头针能有效提高BDNF、TrkB、CREB等蛋白的表达，上调BDNF/TrkB/CREB信号通路，从而促进BNDF自分泌的良性循环，进而促进BDNF对脑组织细胞的修复作用和细胞保护作用，结合行为学和病理组织学的结论，头针对这一信号通路的影响证明了头针“治神”能改善“髓虚”，进而起到“调形”的功效。
4.证明了头针能激活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路，并可能通过激活该信号通路促进GSK-3β的磷酸化，抑制GSK-3β的促凋亡作用，从而对脑组织细胞起到保护作用，结合上述实验结论，头针可能通过上调BDNF与TrkB的表达，进一步激活的下游PI3K/Akt/GSK-3β信号通路，起到了对“脑损”组织的治疗作用，即“治神”，进而促进了行为学的恢复，即“调形”，从这一角度阐释了“治神”与“调形”的关系。