5-aza-CdR对人肝癌细胞HepG2增殖及Beclin1表达的影响

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目的:观察5-脱氧杂氮胞苷(5-aza-CdR)对人肝癌细胞HepG2增殖抑制及Beclin1表达的影响,以探讨其抗肿瘤发生的潜在机制。方法:人肝癌细胞HepG2用RPMI1640培养基常规培养,取对数期细胞用于实验。用浓度分别为0μmol/L、0.4μmol/L、1.6μmol/L、6.4μmol/L、25.6μmol/L、102.4μmol/L的5-aza-CdR处理人肝癌细胞HepG2,药物作用24h、48h、72h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测5-aza-CdR对人肝癌细胞HepG2的增殖抑制;用相差显微镜观察不同药物浓度下不同时间段的人肝癌细胞HepG2形态学改变;采用RT-PCR法和Western blot法检测5-aza-CdR对抑癌基因Beclin1的mRNA转录和蛋白表达的影响。结果:MTT法检测结果显示,人肝癌细胞HepG2在0μmol/L,0.4μmol/L,1.6μmol/L,6.4μmol/L,25.6μmol/L,102.4μmol/L的5-aza-CdR处理72h后,细胞增殖抑制率分别为(1.1±0.36)%、(10.80±2.27)%、(35.21±3.25)%、(49.20±3.28)%、(75.70±2.41)%、(84.30±3.31)%,5-aza-CdR可抑制人肝癌细胞HepG2增殖,呈浓度依赖性,且存在时间依赖性。RT-PCR法和Western blot法检测结果显示5-aza-CdR上调Beclin1mRNA和蛋白的表达水平,在102.4μmol/L5-aza-CdR作用72小时后,人肝癌细胞HepG2Beclin1转录mRNA和表达蛋白的相对比值分别是5.938±0.112、23.902±0.4910,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:1.5-aza-CdR抑制人肝癌细胞HepG2增殖。2.5-aza-CdR上调人肝癌细胞HepG2Beclin1mRNA和蛋白的表达水平,呈浓度和时间依赖性。
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