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研究目的1.通过收集急性心肌梗死(AMI)并行急诊冠脉介入术(PCI)患者术前、术后的四诊资料,探讨行急诊PCI术患者围手术期的中医证候规律,为临床中医诊治提供依据。2.通过建立大鼠离体心脏灌流模型,探讨具有活血益气功效的五加科植物龙牙楤木的提取物龙牙楤木总皂苷对缺血再灌注损伤大鼠心肌的保护作用及其机制。为龙牙楤木总皂苷在临床上防治缺血再灌注损伤提供实验依据。研究方法1.基于前瞻性、观察性研究方法,选择符合标准的AMI并实施急诊PCI手术患者作为研究对象。根据研究目的和相关文献研究结论建立信息采集表,收集患者基本信息、中医四诊信息并建立数据库。采用spss18.0聚类分析方法进行分析。探讨AMI行急诊PCI术患者围手术期中医证候分布规律。2.采用随机数字表法将Wistar大鼠随机分为6组,分别为对照组、模型组、二氮嗪组(DZ组)、5-羟基癸酸组(5-HD组)、龙牙楤木总皂苷组和龙牙楤木总皂苷+5-HD组,每组10只,建立Langendorff离体心脏灌流模型。HE染色观察心肌组织,Western-blot方法检测线粒体细胞色素C表达情况,JC-1法检测线粒体膜电位,免疫组化方法检测Caspase-3、 Bax、 Bcl-2表达情况,酶联免疫法检测线粒体ATP含量、线粒体Ca2+含量、心肌组织MDA、 SOD、 ROS、 GSH-PX含量。研究结果1.AMI患者男女比例为4.09：1,男女比例有明显差异。AMI患者年龄段聚集在40-70岁之间,多为新近发病,前壁、下壁AMI占比例较大,罪犯血管以前降支最多,其次为右冠和回旋支。发生缺血再灌注损伤的患者为26例,占23.2%。AMI患者合并疾病以高血压、糖尿病居多。通过对四诊信息进行聚类分析后得到,急诊PCI术前聚为5类,急诊PCI术后聚为4类较符合临床实际,急诊PCI术前中医证型分别为痰瘀互结证、气虚血瘀证、心血瘀阻证、气阴不足证、气滞血瘀证,急诊PCI术后中医证型分别为气虚血瘀证、气虚血瘀痰阻证、气阴不足证、气滞血瘀证。急诊PCI术前中医证型中痰瘀互结证最多,其次为气虚血瘀证,急诊PCI术后多为虚实夹杂证,气虚血瘀证最多,其次为气虚血瘀痰阻证。在发生缺血再灌注损伤的病人中,急诊PCI术前、术后气虚血瘀证分别占42.31%、61.54%。2.①HE染色：假手术组：心肌细胞横纹清晰,核居中,排列规则、有序,细胞未见变性、坏死,间质血管无扩张,未见炎细胞浸润。模型组：心肌细胞中度肿胀变性,局部细胞肌浆溶解空泡变,细胞排列紊乱,局部心肌组织纤维化,间质疏松,多量炎细胞浸润,血管扩张充血。DZ组：心肌细胞横纹清晰,核居中,排列规则、有序,细胞轻度肿胀变性,间质疏松,少量炎细胞浸润。5-HD组：心肌细胞中度肿胀变性,局部细胞肌浆溶解空泡变,心肌排列紊乱,灶性纤维组织增生,分割心肌呈岛状,间质疏松,多量炎细胞浸润,血管扩张充血。龙牙组：心肌细胞横纹清晰,核居中,排列规则、有序,细胞轻度肿胀变性,肌束间隔增大,间质疏松,少量炎细胞浸润。龙牙+5HD组：心肌细胞轻度肿胀变性,局部心肌细胞断裂,细胞排列无序,心肌束间隔增大,间质疏松,多量炎细胞浸润,血管扩张充血。②线粒体细胞色素C表达：与假手术组相比,模型组细胞色素C相对量表达降低(P<0.05)。与模型组相比,DZ组和龙牙组细胞色素C相对量表达明显增加(P<0.01),5-HD组、5龙组细胞色素C相对量表达明显降低(P<0.01)。与DZ组相比,龙牙组细胞色素C相对量表达减少(P>0.05)。与5-HD组相比,5龙组细胞色素C相对量表达增加(P>0.05)。③线粒体膜电位：与假手术组相比,模型组膜电位明显降低(P<0.01)。DZ组、龙牙组膜电位明显高于模型组(P<0.01),5-HD组、5龙组膜电位明显低于模型组(P<0.01)。龙牙组膜电位高于DZ组(P>0.05)。5龙组膜电位高于5-HD组(P>0.05)。④Caspase-3、Bax、 Bcl-2表达：与假手术组相比,模型组、DZ组、5-HD组、5龙组Caspase-3表达明显增多(P<0.01),龙牙组Caspase-3表达增多(P<0.05)。与模型组相比,龙牙组、DZ组Caspase-3表达减少(P<0.05),5-HD组Caspase-3表达增多(P<0.05),5龙组Caspase-3表达增多(P>0.05)。与DZ组相比,龙牙组Caspase-3表达减少(P>0.05)。5龙组Caspase-3表达少于5-HD组(P>0.05)。与假手术组相比,模型组Bax表达增多(P<0.05),5-HD组、5龙组Bax表达均明显增多(P<0.01),DZ组、龙牙组Bax表达增多(P>0.05)。与模型组相比,DZ组、龙牙组Bax表达减少(P<0.05),5龙组Bax表达增多(P>0.05),5-HD组Bax表达增多(P<0.05)。龙牙组Bax表达少于DZ组(P>0.05)。5龙组Bax表达少于5-HD组(P>0.05)。与假手术组相比,模型组Bcl-2表达减少(P<0.05),5-HD组、5龙组Bcl-2表达明显减少(P<0.01),DZ组、龙牙组Bcl-2表达减少(P>0.05)。与模型组相比,DZ组、龙牙组Bcl-2表达增多(P<0.05),5-HD组Bcl-2表达减少(P<0.05),5龙组Bcl-2表达减少(P>0.05)。与DZ组相比,龙牙组Bcl-2表达减少(P>0.05)。与5-HD组相比,5龙组Bcl-2表达增加(P>0.05)。⑤线粒体ATP含量：与假手术组相比,各组线粒体内ATP含量均明显减少(P<0.01)。与模型组相比,DZ组、龙牙组线粒体内ATP含量明显增多(P<0.01),5龙组线粒体内ATP含量减少(P<0.05),5-HD组线粒体内ATP含量明显减少(P<0.01)。与DZ组相比,龙牙组线粒体内ATP含量明显增多(P<0.01)。与5-HD组相比,5龙组线粒体内ATP含量增多(P<0.05)。⑥线粒体Ca2+含量：与假手术组相比,各组心肌线粒体内Ca2+含量均增加(P<0.01)。与模型组相比,DZ组、龙牙组线粒体内Ca2+含量明显减少(P<0.01),5-HD组、5龙组线粒体内Ca2+含量明显增加(P<0.01)。龙牙组线粒体内Ca2+含量低于DZ组(P<0.05)。5龙组线粒体内Ca2+含量低于5-HD组(P<0.05)。⑦心肌组织MDA、 SOD、 ROS、 GSH-PX含量：与假手术组相比,各组MDA含量均显著增加(P<0.01)。与模型组相比,DZ组、龙牙组MDA含量明显减少(P<0.01),5-HD组、5龙组MDA含量明显增加(P<0.01)。龙牙组MDA含量低于DZ组(P>0.05)。与5-HD组相比,5龙组MDA含量明显减少(P<0.01)。与假手术组相比,模型组、5-HD组、5龙组、龙牙组SOD含量均明显减少(P<0.01),DZ组SOD含量减少(P<0.05)。DZ组、龙牙组SOD含量明显高于模型组(P<0.01),5-HD组SOD含量低于模型组(P<0.05),5龙组SOD含量低于模型组(P>0.05)。与DZ组相比,龙牙组SOD含量减少(P>0.05)。5龙组SOD含量高于5-HD组(P>0.05)。与假手术组相比,模型组、DZ组、5-HD组、5龙组ROS含量均明显增加(P<0.01),龙牙组ROS含量增加(P<0.05)。与模型组相比,DZ组、龙牙组ROS含量均明显减少,5-HD组、5龙组ROS含量均明显增加(P<0.01)。龙牙组ROS含量低于DZ组(P>0.05)。5龙组ROS含量低于5-HD组(P>0.05)。与假手术组相比,模型组、5-HD组、5龙组、DZ组GSH-PX含量均明显减少(P<0.01),龙牙组GSH-PX含量减少(P<0.05)。与模型组相比,DZ组、龙牙组GSH-PX含量明显增加(P<0.01),5-HD组GSH-PX含量明显减少(P<0.01),5龙组GSH-PX含量减少(P>0.05)。龙牙组GSH-PX含量高于DZ组(P>0.05)。5龙组GSH-PX含量高于5-HD组(P>0.05)。研究结论1.急诊PCI术前,患者标实症状突出,瘀血痹阻心脉因而胸痛为各证型的突出表现。急诊PCI术后,患者胸痛、胸闷症状大多得到了改善,本虚征象表现出来,但总以瘀血为标实。气虚血瘀证者在开通罪犯血管后易发生缺血再灌注损伤。2.发生MIRI后,心肌组织发生了明显的病理改变：心肌细胞发生肿胀、细胞肌浆溶解、局部心肌组织纤维化改变、炎细胞浸润、血管扩张；线粒体细胞色素C相对表达量、ATP含量、膜电位下降；Ca2+含量增加；细胞凋亡物质增多；氧化应激和抗氧化应激平衡失调。龙牙楤木总皂苷能够开放mitoKATP,稳定线粒体膜电位,降低线粒体膜通透性,改善能量代谢,促进线粒体合成高能磷酸化合物,促进线粒体呼吸功能恢复,减轻钙超载,抑制氧化应激反应,抑制心肌细胞凋亡,保护缺血再灌注损伤心肌细胞,但龙牙楤木总皂苷对心肌细胞的保护作用会被mitoKATP抑制剂5-HD减弱。