褪黑素缓解尼古丁暴露损害小鼠卵泡发生和发育的研究

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伴随西方国家育龄女性吸烟率呈增加趋势,烟草燃烧产生的尼古丁对女性生殖健康及其后代造成严重影响,如原始卵泡数量减少和卵子质量下降。但尼古丁影响原始卵泡形成的分子机制至今尚未报道,本研究着重于尼古丁暴露对小鼠原始卵泡形成的影响。  本研究以出生24小时内新生小鼠为实验材料,采用尼古丁腹腔注射,按1mg/kg体重/天尼古丁持续5天给药处理。借助实时定量PCR(Q-RCR)、蛋白免疫印迹(WesternBlot)和免疫组化(IF)等实验技术,实验结果显示:与尼古丁和褪黑素处理组相比,尼古丁处理组Cyst卵母细胞数占总的MVH阳性细胞数比例升高15%;卵母细胞特异表达基因Lhx8、Figlα和Sohlh2表达量下降;氧化应激水平升高,AMPKα1蛋白表达量升高,抗自噬蛋白AKT和mTOR表达量下降,自噬相关蛋白LC3B和Beclin-1表达量升高;卵母细胞中形成较多的自噬体杯。此外,本研究还利用0天卵巢体外培养技术,探究尼古丁对体细胞增殖的影响。实验结果发现:10μM尼古丁连续5天暴露0天卵巢,抑制Cyst解聚和原始卵泡形成;与对照组相比,尼古丁处理组有20%的体细胞增殖减少,加入1μM褪黑素提高体细胞增殖。  综上,尼古丁抑制Cyst解聚和原始卵泡卵泡形成,并对卵母细胞造成损伤,且该损伤作用会一直持续到小鼠性成熟即出生后21天,褪黑素可以缓解尼古丁对卵巢造成的损伤。
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