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原发性肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是我国的常见恶性肿瘤,防治肝癌是全世界防治疾病的重要任务,是医学领域亟待解决的重大课题。
p160蛋白家族的乳腺癌扩增性抗原1(Amplified in Breast Cancer1,AIB1)是一种具有多种生理学功能的转录协同因子,它能够与核受体等多种转录因子相互作用从而增强它们的转录活性。多项研究证明,A1B1在多种肿瘤的恶化过程中起重要的作用。AIB1在68%的肝癌组织中过表达,并且能够促进肝癌细胞的增殖、侵袭和成瘤,是一种公认的癌基因。AIB1由多个功能性结构域组成,其中CBP/p300相互作用结构域(CBP/p300-interaction domain,CBP)参与了AIB1与辅激活因子CBP/p300的结合,而CBP/p300在核受体上的募集是AIB1发挥反式激活作用,行使其促转录作用的必要条件。
SELEX是“配体通过指数富集达到系统进化”(Systematic evolution of ligandsby exponential enrichment)的缩写,用于研究小分子核酸与靶物质相结合的部位、序列及空间构象。经SELEX筛选出的配体为适配子(Aptamer),能够起到识别靶标蛋白甚至其生物活性抑制的作用。
因此,我们计划用SELEX技术筛选获得特异性和AIB1的CID结构域结合,并抑制AIB1对CPB/p300的募集作用的核酸适配子,从而抑制其促转录激活作用,为肝癌的治疗提供了创新性的思路和方法。
本文以AIB1蛋白的CID结构域为靶标,构建其真核表达载体,获得AIB1-CID-Flag融合蛋白,经过12轮的筛选,获得了8条强结合能力的单链DNA核酸适配子。我们选择其中最优的23号序列作为研究对象,分别检测了它与AIB1五个功能结构域的结合情况和与p160家族三个成员的结合情况。最后,我们用免疫共沉淀验证了筛选所得的CID23核酸适配子能够抑制AIB1对p300蛋白的募集作用。说明我们已经初步筛选得到能够抑制AIB1促转录活性的核酸适配子。