【摘 要】
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目的:研究磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidyl inositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,Akt)通路以及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在口腔黏膜下纤维化(oral submucous fibrosis,OSF)中的表达,分析PI3K/Akt通路与VEGF的相关性并初步探
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目的:研究磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidyl inositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,Akt)通路以及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在口腔黏膜下纤维化(oral submucous fibrosis,OSF)中的表达,分析PI3K/Akt通路与VEGF的相关性并初步探讨参与OSF的机理。方法:选取海南省人民医院门诊部活检手术切取的组织,经苏木精-伊红染色(hematoxylin and eosin staining,HE)验证为人颊OSF组织30例(早、中、晚期各10例)和正常组织10例,通过HE染色法观察OSF组织中的胶原沉积、血管变化等病理改变。应用Masson染色法观察OSF的纤维化程度。利用免疫组织化学法检测OSF的早、中、晚期组织及正常组织的胶原标记分子Ⅰ型胶原蛋白(collagen type I,Col-I)、PI3K、Akt及VEGF的蛋白表达水平。运用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q PCR)技术检测OSF的早、中、晚期组织及正常组织的PI3K、Akt、VEGF及促纤维化标记分子TGF-β的m RNA表达水平。利用蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)技术检测Col-Ⅰ、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt及VEGF的蛋白在OSF的早、中、晚期组织及正常组织的表达情况。运用Graph Pad Prism8软件初步分析PI3K、Akt与VEGF之间的相关性。结果:1、HE染色结果:OSF早期组织可见黏膜下层大量炎症细胞浸润,毛细血管增生、扩张,胶原沉积逐渐增加。OSF中期可见局部上皮萎缩,黏膜下层炎症细胞浸润,胶原沉积逐渐增多,血管正常或收缩。OSF晚期可见上皮萎缩,上皮钉突扁平,黏膜下层炎症细胞浸润,固有层胶原致密,血管明显减少。2、Masson染色后可使胶原呈蓝色,在正常组织中可见胶原呈弥漫散在分布,随着OSF加重,胶原沉积逐渐从网状分布到片状分布,表明纤维化在OSF的早、中、晚期中逐渐加重。3、免疫组化结果显示:Col-I在正常组织的固有层中呈弥漫散在分布,在OSF的早、中、晚期组织中表达逐渐增多。VEGF定位于上皮的基底层及黏膜下层的成纤维细胞、血管内皮细胞及炎症细胞,在OSF早期组织中表达增加,在中、晚期组织中表达下降。PI3K主要表达于上皮的基底层、棘层及黏膜下层的炎症细胞、血管内皮细胞及成纤维细胞,在OSF早期组织中表达增加,在中、晚期组织中表达下降。Akt主要表达于上皮的基底层、棘层及黏膜下层的炎症细胞、血管内皮细胞及成纤维细胞,在OSF早期组织中表达增加,在中、晚期组织中表达下降。4、q PCR实验结果显示:TGF-β在正常组织及OSF组织中均表达,在OSF的早、中、晚期组织中表达逐渐增加,晚期表达与正常组织、OSF早、中期组织相比,差异具有统计学意义。VEGF、PI3K、Akt的m RNA在OSF早期组织中明显增加,与正常组织及OSF中、晚期组织相比,差别具有统计学意义(P<0.05),随后在中、晚期组织中表达下降。采用Spearman法分析VEGF与PI3K、Akt在OSF组织中的表达关系,结果显示VEGF m RNA与PI3K m RNA表达呈正相关(P<0.05),与Akt m RNA表达也呈正相关(P<0.05),差异均有统计学意义。5、WB实验结果:OSF的早、中、晚期及正常组织中的Col-Ⅰ、PI3K、pPI3K、Akt、p-Akt及VEGF均有表达。Col-Ⅰ蛋白在OSF在早、中、晚期的表达逐渐增多,晚期表达较正常组织及OSF早、中期组织高,差别具有统计学意义(P<0.05)。PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt及VEGF在OSF早期组织中明显增加,与正常组织及OSF中、晚期组织比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。经Spearman法分析VEGF与PI3K、Akt在OSF组织中的表达关系,结果显示VEGF蛋白与PI3K蛋白表达呈正相关(P<0.05),与Akt蛋白表达也呈正相关(P<0.05),差异均有统计学意义。结论:1、PI3K、Akt及VEGF在OSF早期组织中表达升高,在中、晚期表达降低,表明PI3K/Akt通路及VEGF可能参与OSF的发展。2、在OSF组织中VEGF与PI3K、Akt在一定程度上呈显著正相关,可能在OSF的发展过程中具有协同效应。
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