纳米氢氧化镁改性AH Plus对MC3T3-E1生物学性能影响的体外研究

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目的:慢性根尖周炎通常伴有牙槽骨的吸收。只有去除根管内的病源,促进成骨细胞活性,受损的根尖周组织才能逐渐修复。AH Plus(AH)由于其有良好的密闭性、尺寸稳定性、自粘合性及X线阻射性等优越的理化特性,在牙体牙髓领域得到了广泛的应用。然而,有学者发现AH的生物活性较弱。在本研究中,我们将纳米氢氧化镁(nano-magnesium hydroxide,NMH)添加到AH根管封闭剂中制备成改性AH,以增强AH的生物活性。由于NMH成本低廉、可以中和炎症产生的酸性产物并促进新骨形成,如果能够推广使用可大大提高根管治疗的成功率又可降低治疗费用,缩短慢性根尖周炎的愈合时间。本实验旨在研究纳米氢氧化镁、改性AH的理化性能及对小鼠前成骨细胞(MC3T3-E1)增殖、黏附、分化等生物学性能的影响。材料和方法:采用扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)、X射线衍射(X-ray diffraction,XRD)对NMH的微观形貌、物相组成进行分析。将AH和含3%、5%、7%NMH(w/w)的改性AH样品制备成直径10mm高度5mm的“圆盘”。采用SEM、pH计及电感耦合等离子发射光谱仪(ICP-AES)对AH及改性AH的微观形貌、酸碱度及镁离子释放进行研究。制备NMH和改性AH的细胞条件培养基,测量细胞条件培养基的pH值,分别进行MC3T3-E1培养,CCK-8检测1、2、3 d细胞增殖能力;碱性磷酸酶(ALP)染色和Real-time PCR分别检测碱性磷酸酶活性、成骨相关基因(Runx2、ALP、OCN)的表达水平,评估NMH和改性AH对MC3T3-E1细胞的成骨分化能力的影响。通过SEM检测MC3T3-E1细胞在改性AH材料表面的粘附和扩散,还研究了改性AH的流动性。采用单因素方差分析及LSD-t检验进行统计学分析,P<0.05为差异具有统计学意义。结果:NMH条件培养基随着浓度的增高pH值增高,差异有显著性。低浓度NMH促进MC3T3-E1的增殖(P<0.05),高浓度NMH对细胞增殖有抑制作用(P<0.05)。低浓度NMH促进MC3T3-E1的Runx2、ALP、OCN表达水平(P<0.05)。改性AH组中pH值、镁的分布及释放量随NMH添加比例的增加逐渐增高,差异有显著性。其中AH+3%NMH对MC3T3-E1增殖、黏附及成骨分化有明显影响,差异具有显著性。AH+3%NMH的流动性(17.89±0.09 mm)低于AH(21.60±0.11 mm)(P<0.05),但是符合ISO标准(17 mm)。结论:改性AH可以促进MC3T3-E1增殖、黏附及成骨分化,尤其是AH+3%NMH具有出色的生物相容性和生物活性,在牙体牙髓领域可能有广阔的应用前景。
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