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目的:培养及鉴定人牙髓细胞（Human dental pulp cells,hDPCs）,并通过观察骨形态发生蛋白2（Bone morphogenetic protein-2,BMP-2）、生物材料iRoot BP Plus诱导牙髓细胞分化成为成牙本质样细胞的过程中,BMP-2、iRoot BP Plus及BMP-2与iRoot BP Plus联合分别对牙髓细胞增殖、分化方面的影响,为活髓保存提供理论依据和实验参考。方法:1.hDPCs的体外分离、培养:选取我院口腔颌面外科门诊,患者年龄为12-20岁,因阻生或者正畸而拔除的新鲜的完整的第三磨牙或前磨牙,1小时内转移至无菌条件下沿牙体长轴将离体牙劈开,取出牙髓组织后剪去根尖部约2mm的组织,剩余牙髓组织采用改良组织块酶消化法进行hDPCs的原代培养。待细胞汇合至培养瓶底约80%时,加入0.25%胰蛋白酶消化,进行传代培养。冻存备用具有稳定传代能力的2-5代hDPCs。2.hDPCs的鉴定1)经流式细胞仪对hDPCs进行间充质干细胞表面标记物CD44、CD90,造血干细胞表面标志物CD34、CD45鉴定。2)通过成脂及成骨诱导对所培养的hDPCs进行多向分化潜能鉴定。3.BMP-2、iRoot BP Plus对hDPCs增殖的影响:本实验分为四组,实验组为BP组（浓度为0.2mg/m L iRoot BP Plus）、BMP-2组（浓度为100ng/m L BMP-2）、BP+BMP-2组（浓度0.2mg/m L iRoot BP Plus+100ng/m L BMP-2）及对照组（含10%FBS及1%双抗的DMEM培养液）,采用CCK-8检测试剂盒测定各组在不同的诱导时间（1d、3d、5d、7d）对hDPCs增殖的影响。4.BMP-2、iRoot BP Plus对hDPCs分化的影响:1)碱性磷酸酶（Alkaline Phosghatasse,ALP）活性检测:实验分组同上,采用碱性磷酸酶（ALP）试剂盒在诱导的第7天及第14天检测各组牙髓细胞的ALP活性。2)qRCR检测成牙本质相关基因:实验分组同上,在诱导的第5天及第7天利用q PCR检测各组牙髓细胞中ALP、DSPP、BSP的m RNA相对表达量。5.各组数据采用SPSS26.0软件对各组数据,进行单因素方差分析及t检验（检验水准α=0.05,P＜0.05表明有统计学差异）,Graphpad Prism5进行绘图。结果:1.hDPCs的体外分离、培养:通过改良组织块酶消化法接种24h后,倒置显微镜下可观察到有散在的细胞贴壁生长,3天后可以观察到有细胞从组织块周围爬出,以组织块为中心,呈放射状生长,细胞形态均一,呈长梭形,有突起,细胞核呈圆形,居中;7天后细胞逐渐融合,即可生长至培养瓶底的80%;传代后2代细胞镜下可见细胞形态呈成纤维细胞样,较均一,呈放射状或者漩涡状生长。2.hDPCs的鉴定1)经流式细胞术检测所培养的hDPCs,间充质干细胞表面标记物CD44、CD90表达呈阳性,造血干细胞表面标志物CD34、CD45表达呈阴性,表明所培养的hDPCs具有间充质干细胞特性。2)成骨诱导21天后所培养的hDPCs可分化为成骨细胞,茜素红染色可见到大量红色和黑色的钙及磷酸盐沉积物,有钙化结节形成;成脂诱导21天后所培养的hDPCs可分化为脂肪细胞,油红O染色可见脂质形成,大量淡黄色的脂滴,大小不等,分布不均。3.BMP-2、iRoot BP Plus对hDPCs增殖的影响:随着培养时间的延长,各组牙髓细胞OD值逐渐增长,3-5天时为对数增长期,7天以后缓慢增长;诱导第1天时各组OD值之间无明显差异（P≥0.05）,第3、5、7天时BP+BMP-2组OD值均高于其它各组,差异具有统计学意义（P＜0.05）,其中第3天、第5天时BMP-2组与BP组之间无明显差异（P≥0.05）,第7天时BMP-2组OD值明显高于BP组OD值,差异具有统计学意义（P＜0.05）。4.BMP-2、iRoot BP Plus对hDPCs分化的影响1)碱性磷酸酶（ALP）活性检测显示:诱导7天及第14天时,BMP-2组、BP组及BP+BMP-2组ALP活性均高于对照组,其中BP+BMP-2组最高,BMP-2组次之,最后是BP组,差异具有统计学意义（P＜0.05）,同时第14天较第7天相比各组ALP活性均上调。2)qPCR检测成牙本质相关基因结果显示:诱导5天时,各实验组与对照组相比除BSP基因相对表达量无明显差异外（P≥0.05）,ALP、DSPP基因m RNA相对表达量均高于对照组,其中BP+BMP-2组显著高于BMP-2组、BP组,BMP-2组高于BP组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;诱导7天时,各组基因表达均上调,各实验组DSPP、ALP、BSP基因m RNA相对表达量均高于对照组,其中BP+BMP-2组高于BMP-2组、BP组,BMP-2组高于BP组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.利用改良组织块酶消化法可成功培养出具有成骨、成脂分化潜能的hDPCs。2.BMP-2、iRoot BP Plus均可提高hDPCs的增殖及成牙本质分化能力。3.BMP-2较iRoot BP Plus在诱导hDPCs增殖、分化方面更具优势。4.BMP-2与iRoot BP Plus联合可发挥协同作用,较单独使用BMP2、iRoot BP Plus更能显著增加人牙髓细胞增殖及成牙本质分化能力,发挥高效的诱导能力。