枯草芽孢杆菌作为有益微生物,其产生的抗菌物质大多为低分子抗菌肽(Lipopeptides)。抗菌肽作为一种天然新型抗生素,具有抗药性、低毒、抗菌谱广、热稳定性高、生物可降解等优点。另一方面,由黄曲霉菌所产生的黄曲霉毒素是迄今为止发现的致癌性最强的天然污染物,目前使用物理、化学等方法来抑制黄曲霉的生长,其效果并不理想且成本较高。因此,利用生物防治的方法去除和抑制霉菌,成为当前国内外的研究热点。为了获得高产量抗菌肽的菌株,本研究以实验室已获得的枯草芽孢杆菌诱变菌mutHS-301作为出发菌株,进一步进行紫外化学复合诱变,并进行随机筛选。采用牛津杯法进行初筛和复筛,最终获得一株抑菌效果好、且遗传性能稳定的突变菌株,命名为枯草芽孢杆菌mutHS-407。将该诱变菌株进行摇瓶发酵,再将发酵液进行固液分离,得到的上清液经酸沉淀分离和有机溶剂抽提,最后浓缩干燥得到粗提物,其产率为2.305g/L,比出发菌株产率提高了17.3%。抑菌实验表明,菌株mutHS-407所产生的活性物质对金黄葡萄球菌,副溶血性弧菌,铜绿假单孢菌和黄曲霉菌均具有显著的抑菌作用。通过Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳分析,检测到该提取物中所包含活性物质的分子量在3.3 Da以下。利用硅胶柱层析和大孔吸附树脂对该粗提物进行分离纯化,最后得到一个单组分,并检测到它具有很强的抗霉菌活性。进一步利用高效液相色谱(HPLC)对纯化的组分进行分析,结果表明该组分在保留时间为16-18 min时产生单峰,其含量高达92.42%;经质谱(MALDI-TOF-MS)分析和数据比对,鉴定其中的主要成分为杆菌霉素D(Bacillomycin D)。进一步将菌株mutHS-407发酵产生的活性提取物应用到花生的抗霉菌试验中。首先,通过对花生储藏环境条件的筛选,最终确定了模拟花生遭受黄曲霉霉变的条件,即在50克花生中加水量为15mL,黄曲霉(1.5×10~4 cfu/mL)接种量为400μL,搅拌均匀后在37℃下培养6 d,此时花生全部发霉。第二,用不同浓度的该抗菌提取物处理已接种黄曲霉的花生,培养10天后进行观察;结果表明:添加120 mg/mL的抗菌提取物能够有效地抑制花生感染黄曲霉菌。最后,将菌株mutHS-407发酵液直接喷雾干燥并得到抗菌肽干粉,再将此产品与目前已商业化应用的5种常见防霉剂进行花生抗霉菌试验的比较和评估;结果表明,除了一种化学防霉剂以外,该实验中由菌株mutHS-407发酵制备的抗菌提取物的防霉效果均显著优于其它生物防霉剂。因此该抗菌肽物质有望开发成为新型生物防霉剂,并应用到食品及饲料工业中。