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目的微囊藻毒素-LR（microcystin-LR,MC-LR）是一种由水华蓝藻产生的环状七肽毒素,肝脏是其毒性作用的首要靶器官。山楂是药食两用的传统中药材,味酸、微温、入肝经,具有抗氧化、抗炎等功效,但其对MC-LR造成的肝脏损伤是否有缓解作用还不清楚。为此,本研究使用C57BL/6N小鼠作为动物模型,研究山楂提取物（hawthorn fruit extract,HFE）对MC-LR诱导C57BL/6N小鼠肝脏损伤的保护效应,并使用人正常肝细胞系L02探讨HFE发挥肝损伤保护作用的机制,这有助于丰富山楂的药理作用及功效,并为防控MC-LR肝毒性、保护人群肝脏健康提供理论基础。方法1.动物模型建立及细胞实验暴露浓度确定将24只C57BL/6N小鼠随机分成4个处理组,分别为对照组、200 mg/kg HFE组、20μg/kg MC-LR组、MC-LR+HFE组,通过腹腔注射MC-LR及灌胃HFE 14天后,解剖小鼠取肝脏组织,用于后续实验;培养L02细胞,分别将L02细胞暴露于不同浓度MC-LR（0、1、5、10、20、40、60、80μg/mL）和HFE（0、0.25、0.5、1、2、4、8、12 mg/mL）24小时,采用CCK-8试剂盒测定细胞活性,确定细胞实验中MC-LR和HFE的暴露浓度。2.HFE预处理及MC-LR染毒引起C57BL/6N小鼠肝脏病理学改变的检测C57BL/6N小鼠饲养过程中,每日记录小鼠体重。解剖后称量肝脏重量,计算肝脏指数。通过H＆E染色、Masson染色及油红O染色检测小鼠肝脏的病理损伤情况。全自动生化仪分析血清中AST、ALT、ALP以及LDH的活性。3.HFE预处理及MC-LR染毒引起C57BL/6N小鼠肝脏和L02细胞中氧化应激相关指标改变的检测HFE预处理及MC-LR染毒后,采用T-SOD检测试剂盒、MDA测定试剂盒联合酶标仪检测各组小鼠肝脏中T-SOD活性,以及MDA含量。采用ROS检测试剂盒联合流式细胞仪检测L02细胞中ROS水平。4.HFE预处理及MC-LR染毒引起L02细胞线粒体膜电位、Cyt C浓度改变的检测HFE预处理及MC-LR染毒后,JC-1染色法联合流式细胞仪测定MC-LR和HFE对L02细胞线粒体膜电位的影响。将L02细胞中的线粒体和细胞质分离后,通过Elisa法分别对线粒体和细胞质中Cyt C的浓度进行检测。5.HFE预处理及MC-LR对C57BL/6N小鼠肝脏和L02细胞中细胞凋亡影响的检测HFE预处理及MC-LR染毒后,通过TUNEL法检测各组小鼠肝脏组织的细胞凋亡程度。Annexin V-FITC/PI法联合流式细胞仪检测L02细胞凋亡率。Western Blot检测Bax,Bcl-2,Caspase-3,Cleaved Caspase-3,Caspase-9,Cleaved Caspase-9的蛋白表达水平。RT-qPCR检测Bax,Bcl-2,Caspase-3,Caspase-9的表达。结果1.HFE缓解MC-LR暴露后C57BL/6N小鼠肝脏病理学损伤HFE预处理有效缓解了MC-LR诱导的小鼠肝脏损伤,降低小鼠肝脏细胞水肿、炎性细胞浸润等病理损伤的程度;HFE避免了MC-LR暴露引起的小鼠体重降低和肝脏指数升高;与MC-LR组相比,HFE预处理明显降低了血清中AST、ALT和ALP的活性（P＜0.05）。2.HFE抑制MC-LR在C57BL/6N小鼠肝脏和L02细胞中引起的氧化应激HFE可以保护肝细胞免受MC-LR引起的氧化应激损伤。与MC-LR组相比,HFE预处理恢复了肝脏中T-SOD的活性,并减少了MDA含量（P＜0.05）。L02细胞经1 mg/mL HFE预处理,以及13、26μg/mL MC-LR染毒后,与单独MCLR组相比,HFE预处理明显降低了MC-LR诱导的ROS过量产生（P＜0.05）。3.HFE缓解MC-LR在L02细胞中诱导的线粒体损伤L02细胞经1 mg/mL HFE预处理,13、26μg/mL MC-LR染毒后,与MC-LR组相比,HFE预处理明显缓解MC-LR诱导的线粒体膜电位降低的程度,并减少了线粒体中Cyt C向细胞质的释放（P＜0.05）。4.HFE减轻MC-LR在C57BL/6N小鼠肝脏和L02细胞中诱导的细胞凋亡程度HFE改善了MC-LR诱导的小鼠肝脏细胞凋亡情况,显著降低L02细胞的凋亡率水平（P＜0.05）。与MC-LR组相比,HFE的干预明显减轻了暴露于MCLR后小鼠肝脏和L02细胞中Bax,Caspase-3,Cleaved Caspase-3,Caspase-9、Cleaved Caspase-9蛋白表达水平的升高,及Bcl-2蛋白表达水平的降低（P＜0.05）。此外,HFE下调了Bax,Caspase-3,Caspase-9的表达,上调了Bcl-2的表达（P＜0.05）。结论1.HFE缓解MC-LR诱导的肝脏损伤。2.HFE对MC-LR诱导肝脏损伤的保护作用与抑制氧化应激和减轻线粒体途径介导的细胞凋亡有关。