背景嗜酸粒细胞浸润是支气管哮喘发病中的重要表现,而嗜酸粒细胞的转归影响着哮喘病情的转归。细胞死亡的途径有两种:一是死亡,另一是凋亡。其中细胞凋亡因为细胞膜的完整可以使致炎物质不外泄。细胞凋亡后因为一系列蛋白在细胞膜上的表达可以被吞噬细胞吞噬。因此凋亡的嗜酸粒细胞被具有吞噬功能的气道上皮细胞吞噬可以减轻支气管哮喘中气道的炎性反应。氨茶碱是治疗支气管哮喘有效的药物,近年的实验及研究表明,氨茶碱除具有舒张支气管的作用外,还有免疫和抗炎的作用。已有文献报道地塞米松可以上调上皮细胞吞噬凋亡的嗜酸粒细胞的能力,并存在浓度依赖效应。对同为治疗支气管哮喘有效的药物,对于氨茶碱是否可以干预上皮细胞,进而影响其吞噬凋亡的嗜酸粒细胞的能力还不清楚。有文献报道氨茶碱可以抑制一些炎性因子的分泌,但氨茶碱对上皮细胞吞噬凋亡的嗜酸粒细胞的干预作用是否与抑制炎性因子的分泌相关还未见报道。因此研究氨茶碱对上皮细胞吞噬凋亡的嗜酸粒细胞干预的作用及对IL-6、IL-8分泌的影响,对研究氨茶碱的在治疗支气管哮喘中的作用及研究其抗炎作用的新思路有着重要的意义,并能为支气管哮喘临床治疗提供新的依据。目的1、构建A549细胞吞噬凋亡的嗜酸粒细胞的模型,为进一步研究氨茶碱对上皮细胞吞噬凋亡的嗜酸粒细胞干预的作用提供细胞模型。2、以A549细胞吞噬凋亡的嗜酸粒细胞的模型为基础,研究氨茶碱对A549细胞吞噬能力的干预作用。并了解有无浓度依赖和时间依赖的关系。3、研究氨茶碱对由脂多糖及凋亡的嗜酸粒细胞分别刺激后的A549细胞分泌的炎性因子有无抑制作用,是否存在浓度依赖关系。4、氨茶碱对上皮细胞吞噬凋亡的嗜酸粒细胞干预的作用与抑制炎性因子的分泌的作用是否相关。方法通过培养获得持续传代的A549细胞,将不同浓度的氨茶碱(0、10-3、10-4、10-5mol/L)在吞噬实验前24、48、72小时加入到A549细胞中;采用磁细胞分离柱(MACS Column)、CD16磁珠抗体、CD15的磁珠抗体分离纯化人外周血嗜酸粒细胞,体外培养48小时后自然老化,通过形态学和AnnexinV-FITC试剂盒进行嗜酸性粒细胞凋亡鉴定,再加入到已用氨茶碱干预后的A549细胞中,使用邻联茴香胺对吞噬的凋亡嗜酸粒细胞进行过氧化物酶染色,再将A549细胞用苏木素加以核衬染。运用Olympus倒置显微镜及Diagnostic Instruments-Spot insigh数字图象采集摄像系统动态观察A549细胞吞噬凋亡嗜酸粒细胞现象,并在光镜下对已固定染色的细胞进行吞噬率统计。另将不同浓度的氨茶碱(0,10-3,10-4,10-5mol/L)分别干预A549细胞、A549与凋亡的嗜酸粒细胞、A549与脂多糖,收获培养后的上清液,采用放射免疫法检测白细胞介素IL-6和IL-8的浓度。结果1、A549细胞分别被氨茶碱干预24、48、72小时后,A549细胞吞噬能力随时间延长明显下降。2、A549细胞在氨茶碱以10-3 mol/L浓度干预时的吞噬能力最低,10-4 mol/L、10-5 mol/L时的吞噬能力明显升高。3、吞噬了凋亡嗜酸粒细胞后A549细胞与未吞噬的A549细胞相比,IL-6、IL-8分泌没有显著差异。但较脂多糖刺激A549细胞后IL-6、IL-8的分泌值明显降低。4、氨茶碱可以抑制脂多糖刺激A549细胞后IL-6、IL-8的分泌且存在浓度依赖关系。结论1、氨茶碱抑制A549细胞吞噬凋亡的嗜酸粒细胞,并具有时间和浓度依赖效应。2、氨茶碱可通过抑制IL-6、IL-8的方式发挥抗炎的作用,并具有浓度依赖效应。3、A549细胞吞噬凋亡的嗜酸粒细胞能降低炎性反应,对支气管哮喘炎症的控制具有重要意义。