传染性法氏囊病和新城疫是家禽和其他鸟类的一种重要病毒性疾病,威胁着家禽业的发展,对世界各地的禽类卫生安全和经济造成重要影响。传染性法氏囊病（Infectious bursal diseases,IBD）是由传染性法氏囊病毒（Infectious bursal diseases virus,IBDV）引起的,鸡感染IBDV后出现严重的免疫抑制,使它们极易受到继发感染,对其他病原体的疫苗接种无反应。传染性法氏囊病疫苗大多基于经典毒株研制,对临床流行的超强毒株或变异株感染的鸡不能产生完全保护。新城疫（Newcastle disease,ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）强毒株引起的一种急性烈性高度接触性的禽类病毒性疾病。新城疫在我国的主要流行毒株为基因Ⅶ型,而主要疫苗株为基因Ⅱ型LaSota弱毒株,基因型的不匹配和活疫苗的不安全性导致新城疫的净化困难重重。上市疫苗已不能满足多种类、多基因型的疫病防控需求,绿色生态、安全高效的新型疫苗已是家禽养殖业发展需求及国家发展战略的重点攻关方向,因此研发一种安全、高效的新型疫苗对IBD和ND的联合防控十分必要。“病毒样颗粒”（virus-like particles,VLPs）不具有完整的病毒基因组,缺乏复制能力,是非感染性的结构化的重组疫苗,能够在有限的空间内显示密集重复表位特征的天然病毒粒子形态,在刺激免疫系统方面具有“强激活剂”的美称,可有效激发体液免疫、细胞免疫以及黏膜免疫。此外,VLPs在生物安全性、免疫原性和载体平台丰富性方面展示了极高的优势。为科学防控IBD和ND,本研究基于新城疫病毒样颗粒载体平台,研发了一种绿色、安全、高效的传染性法氏囊病-新城疫二联嵌合病毒样颗粒（IBD-ND cVLPs）疫苗候选株。嵌合病毒样颗粒囊膜内以NDV基因Ⅶ型NA-1株M蛋白为骨架,外部含有NA-1株的重要保护性抗原HN蛋白、F蛋白以及IBDV流行株SH99株免疫保护性VP2蛋白。经纯化后利用肌肉注射免疫SPF鸡,攻毒之后持续采样,从细胞免疫、体液免疫、攻毒保护力、体内病毒载量、体外排毒时间等方面评估本疫苗的免疫效果。用这种安全、有效的IBD和ND的二联疫苗接种家禽具有潜在优势,免疫可保护鸡免受两种病毒的侵害,减少疫苗成本和劳动力投入,为传染性法氏囊病和新城疫的防制提供了疫苗储备。一、IBD-ND cVLPs的构建和鉴定基于NDV HN蛋白Ⅱ型跨膜蛋白的特点和胞外域替换模式,利用重叠延伸PCR技术方法,将NA-1株HN蛋白的胞内域以及跨膜区与SH99株的VP2蛋白引入柔性肽相连,命名为rBV cHN+VP2。将rBV cHN+VP2与实验室构建保存的rBV-M、rBV-HN、rBV-F一同感染悬浮培养的Sf9细胞,让它们进行充分的自组装,离心纯化后经Western Blot和透射电镜观察鉴定,结果显示cVLPs各组分表达正确且组装后具有囊膜和纤突结构,表明正确构建了含有IBDVVP2保护性基因的IBD-ND cVLPs。二、IBD-ND cVLPs的免疫效果评价商品化的IBDV弱毒疫苗组、NDV弱毒疫苗组利用点眼方式免疫,IBD-ND cVLPs利用肌肉注射方式免疫。免疫过后对实验动物进行攻毒,持续采样分析体重变化、存活率、病毒载量、排毒时间、细胞免疫和体液免疫激活状况评价IBD-ND cVLPs的免疫效果。结果表明二联病毒样颗粒组能够快速的激发体液免疫,且长时间保持抗体水平远高于免疫保护线水平,同时二联病毒样颗粒免疫组各时间点产生的抗体水平与相应的商品化疫苗组相当。而且淋巴细胞增殖实验表明二联病毒样颗粒组与商品化疫苗组的SI值无显著差异（p＜0.5）,二者均能有效诱导淋巴细胞增殖。综上,本研究正确构建了同时含有IBDV流行株SH99株和NDV国内优势流行株NA-1株的保护性抗原的IBD-ND cVLPs,且这种cVLPs具有良好的生物活性和生物形态。免疫鸡群后可诱导中和抗体,T淋巴细胞增殖能力检测表明本实验制备的cVLPs能产生良好的细胞免疫,且在攻毒后体外排毒时间缩短,体内病毒载量降低,这也显示cVLPs能有效阻止病毒复制。本研究不仅丰富了ND VLPs作为载体平台的应用,同时提供了一种绿色、安全、高效的可同时预防IBD和ND的新型疫苗候选株。