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目的：(1)高效可溶性原核表达并纯化猪囊尾蚴抗原cC1；?(2)构建表达抗原cC1的重组耻垢分枝杆菌疫苗。 方法：(1)将重组质粒pET28a-cC1转化到表达宿主菌E.coliBL21(DE3)中，挑取单个菌落，培养扩增至OD600约为0.6，加入诱导剂IPTG，同时设空载体质粒及未诱导的菌株为对照，以SDS-PAGE电泳分析表达产物。对诱导时间和IPTG浓度进行分析，优化表达条件。在优化的条件下，大量培养含pET28a-cC1的菌株，IPTG诱导后超声波破菌，分离上清和沉淀，上清经His亲和层析柱纯化，再通过AKTA explorer100型快速液相蛋白层析分离系统进一步纯化并检测其纯度，采用SDS-PAGE电泳和Wester-blotting对目的蛋白进行分析和验证。(2)提取pET28a-cC1质粒DNA用XhoI和BamHI双酶切，用Kelow酶补平XhoI酶切末端，同时提取pMV261穿梭质粒载体，用HindIII和BamHI双酶切，用Kelow酶补平HindIII酶切末端，纯化后的酶切产物以T4连接酶连接，构建pMV261-cC1穿梭质粒，测序验证正确后，将 pMV261-cC1穿梭质粒经电穿孔法转化耻垢分枝杆菌，构建重组耻垢分枝杆菌疫苗，挑取阳性菌落，培养扩增经热诱导后以 SDS-PAGE电泳分析蛋白表达，并以抗cC1小鼠血清对表达蛋白进行Wester-blotting鉴定。 结果：(1)采用不同浓度的诱导剂和不同的诱导时间对 pET28a-cC1的诱导表达条件进行优化，通过SDS-PAGE电泳分析表达产物，结果为0.05 mmol/LIPTG诱导6 h时可达最大的表达量，再加大诱导剂浓度和延长诱导时间，蛋白表达量不仅未见增加，反而呈下降趋势；超声破菌后分别 SDS-PAGE电泳分析取上清和沉淀，结果表明重组蛋白在37℃时大量表达，且主要为可溶性表达；表达量高达菌体总蛋白的60％；优化条件下大量表达，经His柱纯化，AKTA explorer100型快速液相蛋白层析分离系统检测其纯度，蛋白纯度达到94%。表达的分子量约为40 kD的可溶性融合蛋白能被囊虫病患者血清识别。(2)构建的重组穿梭载体经酶切、测序验 证正确；构建的重组耻垢分枝杆菌疫苗热诱导后经SDS-PAGE电泳分析和western-bloting验证，在40 kD处有蛋白表达，与预期值相符，表明cC1抗原基因在耻垢分枝杆菌中表达。 结论： (1)成功优化了cC1蛋白高效可溶性原核表达条件，获得了纯度达94%且具备抗原性的cC1蛋白。 (2)成功构建了含有cC1基因耻垢分枝杆菌疫苗。