【摘 要】
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目的:本实验旨在探讨在体内研究中15-脂氧酶(15-LO)同工酶在缺氧性肺血管收缩和重构中的表达和定位。
方法:24只Wistar大鼠,随机分成3组:对照组,缺氧组,缺氧加药组(即缺氧+NDG
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目的:本实验旨在探讨在体内研究中15-脂氧酶(15-LO)同工酶在缺氧性肺血管收缩和重构中的表达和定位。
方法:24只Wistar大鼠,随机分成3组:对照组,缺氧组,缺氧加药组(即缺氧+NDGA组)。采用右心导管法测量各个实验组Wistar大鼠肺动脉血压;采用组织浴槽血管环方法观察15-LO的阻断剂NDGA阻断缺氧诱导的内源性15-羟基二十碳四烯酸(15-HETE)产生后,肺动脉收缩力的变化情况;HE染色观察各组大鼠中等大小肺动脉组织形态学变化:免疫组织化学和非同位素原位杂交检测15一LO两种同工酶(15-LO-1和15-LO-2)蛋白质和mRNA的定位情况;Western blot和RT-PCR检测15-LO两种同工酶蛋白质和mRNA的表达情况。
结果:肺动脉血压在缺氧鼠中显著增加,而缺氧+NDGA鼠的肺动脉血压明显降低(P<0.05,n=4);在氯化钾诱导的肺动脉收缩中,缺氧+NDGA组的收缩率低于缺氧组,30 mmol时收缩率从175%到110%,在50 mmol时收缩率从200%到140%(P<0.01,n=6):在苯肾上腺素(PE)诱导的肺动脉收缩中,同氯化钾一样,缺氧+NDGA组的收缩率低于缺氧组,在10-7mol/L时收缩率从145%到110%(P<0.05,n=6):病理形态学发现缺氧9天中等大小肺动脉管壁增厚,而缺氧+NDGA组使其肺动脉壁变薄(P<0.05,n=6);免疫组织化学和原位杂交发现15-LO-1定位在肺动脉内皮细胞上,15-LO-2定位在肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞上,并发现它们在缺氧条件下染色增加,缺氧+NDGA组使其染色降低(P<0.05,n=5);Western blot和RT-PCR检测15-LO两种同工酶蛋白质和mRNA表达在缺氧组中明显增加,而在缺氧+NDGA组中显著降低(P<0.05,n=4)。
结论:体内结果揭示:15-LO-1蛋白质和mRNA定位在肺动脉内皮细胞上,15-LO-2蛋白质和mRNA定位在肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞上,15-LO同工酶蛋白质和mRNA在缺氧组中染色增加,但在缺氧+NDGA组中染色变低;缺氧诱导了鼠肺血管15-LO同工酶蛋白质和mRNA的表达增加,缺氧+NDGA却使其表达降低;缺氧组的肺动脉血压,中等大小肺动脉管壁厚度,肺动脉收缩力均明显增加,而缺氧+NDGA组都使它们显著下降。
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