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新城疫（Newcastle disease,ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）引起的鸡和多种禽类的急性高度接触性传染病,给家禽业造成严重的经济损失。我国鸡群中流行的强毒株主要是基因Ⅶ型的NDV,针对ND的防控,我国主要采取疫苗接种,目前应用的疫苗生产方式主要为鸡胚培养,与鸡胚相比,采用细胞作为培养基质具有易于操作和更可控的优点。本研究旨在从病毒生产方面对NDV的防制进行研究。本研究利用慢病毒载体pHBLV-CMV-MCS-EF1-ZSgreen-puro构建分别过表达鸡的ATG12、ATG16L1基因的BHK-21细胞。经嘌呤霉素筛选所得的阳性细胞分别命名为BHK-21-ATG12细胞和BHK-21-ATG16L1细胞。荧光显微镜下观察,BHK-21-ATG12细胞和BHK-21-ATG16L1细胞绿色荧光丰富;流式细胞仪检测结果显示BHK-21-ATG12细胞和BHK-21-ATG16L1细胞阳性率达90%以上;对比BHK-21细胞,qRT-PCR检测到ATG12、ATG16L1基因分别在BHK-21-ATG12细胞、BHK-21-ATG16L1细胞中的相对表达量上升420倍和280倍;Western Blot检测BHK-21-ATG12细胞和BHK-21-ATG16L1细胞蛋白,分别在约38.6 kD、93.6 kD处检测到特异性蛋白条带,与预测的ATG12、ATG16L1蛋白大小相符。阳性细胞连续传15代后,对比BHK-21细胞,光学显微镜下观察到阳性细胞无明显的形态学变化并且qRT-PCR检测到ATG12、ATG16L1基因分别在BHK-21-ATG12细胞、BHK-21-ATG16L1细胞中的相对表达量上升380倍和260倍。结果表明,ATG12、ATG16L1在构建的重组BHK-21细胞株内获得过表达,且具有遗传稳定性。然后检测了新城疫rGM-Ⅶm株在这2种重组细胞中的增殖情况。将rGM-Ⅶm病毒接种BHK-21-ATG12细胞、BHK-21-ATG16L1细胞和BHK-21细胞。分别收集接毒后12、24、36、48、72、96、120、144和168 h的细胞和细胞上清。提取细胞样品RNA,qRT-PCR检测细胞中病毒复制情况;测定上清样品中病毒HA滴度和TCID50。结果显示,qRT-PCR检测到在接毒后48 h,BHK-21-ATG12细胞中rGM-Ⅶm的NP基因相对表达量高于亲本细胞（p<0.01）,BHK-21-ATG16L1细胞中rGM-Ⅶm的NP基因相对表达量高于亲本细胞（p<0.001）;在接毒后48 h,BHK-21-ATG12细胞上清HA、TCID50分别是亲本细胞的2.46倍（p<0.05）、15.49倍（p<0.001）,BHK-21-ATG16L1细胞上清HA、TCID50分别是亲本细胞的3.25倍（p<0.01）、131.83倍（p<0.001）。与BHK-21细胞相比较,在接毒后48 h,rGM-Ⅶm病毒在BHK-21-ATG12细胞和BHK-21-ATG16L1细胞上的增殖滴度更高。本研究成功构建了稳定过表达鸡ATG12、ATG16L1基因的BHK-21-ATG12细胞和BHK-21-ATG16L1细胞。在接毒后48 h,与BHK-21细胞相比较,rGM-Ⅶm病毒在BHK-21-ATG12细胞和BHK-21-ATG16L1细胞上的增殖滴度更高,在较短时间内能获得更高滴度病毒,其具备生产rGM-Ⅶm病毒疫苗的潜力。