论文部分内容阅读
目的：探讨白细胞介素-15(Interleukin15,IL.15)及骨髓来源树突细胞(Dendritic Cell,DC)对细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokone-Induced Kilker,CIK)细胞增殖能力,免疫表型,以及杀伤肝癌细胞的作用。方法：体外培养小鼠骨髓源性DC,通过流式细胞术(Floweytometry,FCM)检测鉴定DC细胞CD80、CD86.MHC Ⅱ、CDllc表达情况。分为IL-15处理和未处理条件下培养CIK、DC-CIK细胞,通过FCM鉴定CIK细胞中CD3+、CD3+CD8+、 CD3+NK1.1+表达情况。培养分组：CIK,CIK+IL-15,CIK+DC,CIK+IL-15+DC观察IL-15及DC对CIK细胞增殖能力的影响,通过FCM用流式细胞仪检测其免疫表型的变化。将CIK细胞及IL-15刺激后的CIK分别与DC以5：1效靶比进行培养,用台盼蓝活细胞计数计算细胞扩增倍数,FCM检测其表型变化,同时通过测定乳酸脱氢酶(LDH)检验杀伤活性。数据通过用SPSS统计软件包进行数据分析。结果：每只小鼠骨髓细胞可培养出(5.5±0.5)×106个DC,且FCM检测显示DC高表达CD80(95.0＋1.2%).CD86(88.5±1.4%).MHC-Ⅱ(89.2±1.2%)及CDllc(83.3±1.7%).每只小鼠脾脏可获得约(4.5±0.5)×106个CIK细胞,在第14天时35.0±2.7%的细胞为CD3+、18.8±2.4%的细胞为CD3+CD8+、17.1±2.5%的细胞为CD3+NK1.1+。.骨髓源树突细胞刺激及培养体系中加入IL-15后的CIK细胞增殖能力高于常规对照组,CD3+和CD3+CD8+、CD3+NK1.1+双阳性细胞比率均高于常规对照组(P<0.05)。培养后小鼠脾源CIK细胞总数在第10、15天分别为(2.1±0.1)×107,(2.4±0.2)×107,与对照组(0.5×107)相比具有显著性差异(P<0.05)。在2.5：1～20：1的效靶比范围内,IL-15刺激的CIK及DC-CIK细胞对肝癌细胞的杀伤率显著高于CIK细胞(P<0.05),且杀伤率与效靶比呈正相关。在效靶比20：1时,共IL-15刺激的DC-CIK细胞对Hepal-6肝癌细胞杀伤率为(58.75±4.34)%。结论：培养基细胞因子选择法培养可收获大量的骨髓源DC,在多种细胞因子作用下可培养大量脾脏来源的CIK。IL-15和骨髓源性DC均可增加CIK细胞的增殖能力及膜表面抗原的表达率,且二者具有叠加效应。DC刺激增加CIK细胞抗肿瘤细胞的活性,IL-15作用下DC-CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性进一步增强。