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目的:内源性脑肠肽ghrelin作为近年来研究的热点,其对痛觉系统的重要作用引起了我们极大的关注。我们前期研究结果显示,侧脑室注射ghrelin能对小鼠急性痛产生镇痛作用,但其镇痛作用机制仍不清楚。另一方面,针对ghrelin合成困难,成本高等问题筛选出来的ghrelin活性片段ghrelin(1-7)-NH2引起了我们的重视。本课题拟研究ghrelin的镇痛作用机制和ghrelin(1-7)-NH2的镇痛活性以及机制,为后续相关镇痛研究奠定基础。方法:采用温浴甩尾方法来研究ghrelin与各阿片受体的关系,探究ghrelin(1-7)-NH2的镇痛活性以及与阿片系统的关系;采用荧光标记方法研究ghrelin及ghrelin(1-7)-NH2分别产生镇痛作用的中枢确切位点;采用RT-PCR、Western blot方法研究相关基因和蛋白的表达变化情况。结果:1、侧脑室单独注射β-FNA(β-funaltrexamine,μ-阿片受体特异性拮抗剂),NTI(Naltrindole,δ-阿片受体特异性拮抗剂),nor-BNI(nor-binaltorphimine,κ-阿片受体特异性拮抗剂)均不能产生镇痛作用,而分别与ghrelin共注射时,NTI能完全拮抗ghrelin的镇痛作用(P<0.001),另外两个拮抗剂都不能拮抗ghrelin 的镇痛作用(P>0.05)。2、侧脑室注射FAM-ghrelin来确定目标肽注射后在中枢的分布,结果显示FAM-ghrelin经侧脑室注射后主要分布在侧脑室周围,外侧隔阂,第三脑室周围,齿状回,海马等位置。3、RT-PCR 结果显示,注射 ghrelin 后 PENK mRNA(Proenkephalin)和 OPRD(Delta opioid receptor)mRNA表达水平均有显著性升高,而其他相关基因的表达与对照组相比并无明显差异。4、根据RT-PCR结果,我们进一步开展Western blot检测,结果显示与对照组相比,ghrelin注射后GHSR蛋白水平没有明显改变,但PENK蛋白和OPRD蛋白表达在20min内均有显著升高。5、[D-Lys3]-GHRP-6(GHSR-lα特异性拮抗剂)和 DeltorphinⅡ(δ受体内源性激动剂)共注射组与Deltorphin Ⅱ单独注射组相比差异并没有统计学意义(P>0.05)。说明[D-Lys3]-GHRP-6不能拮抗Deltorphin Ⅱ的中枢镇痛作用。6、小鼠侧脑室注射ghrelin(1-7)-NH2能产生时间-浓度依赖的镇痛作用,而这一镇痛作用能被[D-Lys3]-GHRP-6和纳络酮(阿片受体广谱拮抗剂)完全拮抗。7、FAM-ghrelin(1-7)-NH2经侧脑室注射后主要分布在中枢侧脑室周围,外侧隔阂背侧,胼胝体,第三脑室周围,海马,海马裂,东方海马体层等位置。8、RT-PCR结果显示,在注射ghrelin(l-7)-NH2后实验组PENK mRNA和OPRD mRNA表达水平均有显著升高(P<0.01),而其他受体配体mRNA表达与对照组相比差异无统计学意义。9、Western blot检测结果显示侧脑室注射ghrelin(1-7)-NH2后,PENK蛋白和OPRD蛋白表达均有显著升高,而GHSR蛋白表达与对照组相比未见显著差异。结论:1、侧脑室注射ghrelin(1-7)-NH2能产生时间-浓度依赖的镇痛作用,并且作用明显。2、Ghrelin和ghrelin(l-7)-NH2侧脑室注射后均主要分布在中枢脑室周围;通过疼痛行为学和分子实验得出它们的镇痛效应是通过先激活GHSR-1α,然后使下游内源性阿片肽PENK与其受体OPRD表达增多,进而PENK与其受体OPRD结合来产生镇痛作用。3、Ghrelin与ghrelin(1-7)-NH2的镇痛作用机制相似,中枢分布也大同小异,但ghrelin(l-7)-NH2合成简单,成本低,有进一步作为镇痛药物开发的潜力。