【摘 要】
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A型流感病毒猪作为流感病毒一类大分支,根据其宿主的不同,又可以分为人流感、禽流感、猪流感、马流感和犬流感等。猪流感在感染猪后,会引起猪的呼吸系统疾病,主要特征是传播
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A型流感病毒猪作为流感病毒一类大分支,根据其宿主的不同,又可以分为人流感、禽流感、猪流感、马流感和犬流感等。猪流感在感染猪后,会引起猪的呼吸系统疾病,主要特征是传播性高,死亡率低,临床表现为精神沉郁,食欲减退,呼吸困难,发热,咳嗽,呈腹式呼吸,虽然致死率低,但在复杂的养殖环境下,常常和其他疾病混合感染或继发感染,使死亡率大大提高,造成巨大的经济损失。众所周知,在猪的呼吸道上皮细胞表面,同时具有人和禽类所特有的α-2,3和α-2,6受体,使其成为流感病毒“混合器”,从而具有重要的公共卫生学意义。所以监测猪群中流感病毒的流行状况和遗传演化对于猪流感的防控具有重要的指导意义。本研究的样品来源涵盖了广东省的主要养猪地区,包括广州、深圳、珠海、清远、阳江、茂名、江门、肇庆、云浮等地,共采集猪鼻拭子2980份,通过SPF鸡胚和细胞同时分离病毒,共分离出12株病毒,经鉴定,9株为H1N1,2株为H1N2和1株为H3N2。研究从中选取3株具有代表性的毒株,分别命名A/swine/Guangdong/FS4/2016（H3N2）、A/swine/Guangdong/BRT15/2016（H1N1）和A/swine/Guangdong/DG2/2015（H1N2）,简称分别为FS4、BRT15和DG2,及2014年本课题组分离出的1株病毒,命名为A/swine/Guangdong/YJ4/2014（H1N1）,简称YJ4。经全基因组序列测定及遗传进化分析的结果表明,FS4病毒株的HA和NA基因来源于人季节性流感,内部片段均来源于pdm09;DG2病毒株的HA基因来源于欧亚类禽,NA基因来源于人季节性流感,其余的内部片段均来源于pdm/09;BRT15株和YJ4株的HA、NA和M片段均来源于欧亚类禽,其余内部片段则是来源于pdm/09,因此所有毒株均为重组毒。在对4株病毒的致病性研究中,选择5周龄的BALB/c小鼠为实验动物,以滴鼻的方式攻毒,攻毒剂量为106 EID50/50μL。在攻毒后,每天在相同时间点称量小鼠体重并记录,分别在3d和6d时,每个实验组随机选择3只小鼠进行剖杀,检测肺脏和脑中的病毒含量。实验结果显示,DG2病毒株攻毒组的试验小鼠在第4天时全部死亡,小鼠体重个体下降最多的达50.57%,脑部和肺部均能检测到病毒;YJ4病毒株攻毒组小鼠在第5天时全部死亡,个体体重下降最多达44.44%,只有肺部能检测到病毒;BRT15病毒株攻毒组小鼠的最后存活率为28.6%,个体体重下降最多达41.19%,脑和肺中都能检测到病毒;FS4病毒株攻毒组小鼠存活率为100%,小鼠体重只在攻毒后有小幅下降,但很快恢复到正常水平,肺部和脑部在感染前期均能检测到病毒,但病毒很快可以被机体清除。通过对4株病毒HA基因潜在糖基化位点的分析,发现FS4病毒株的HA蛋白上的潜在糖基化位点有7个,比其他3株病毒HA蛋白上的潜在糖基化位点多,这可能是其毒力弱于其他3株病毒的原因之一。对4株病毒的PB2蛋白上氨基酸位点分析可知,与毒力相关的627和701位点并没有出现使病毒毒力增强的突变。
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