人真皮间充质干细胞对增生性瘢痕成纤维细胞α-SMA和DCN表达的影响

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目的初步探讨人真皮间充质干细胞对不同时期增生性瘢痕成纤维细胞a-SMA和DCN表达的影响,以探讨间充质干细胞用于增生性瘢痕的防治的可行性。方法机械法联合酶消化法分离培养人真皮间充质干细胞(hDMSCs)和6个月、1年、2年增生性瘢痕瘢痕(hypertrophic scars, HS)成纤维细胞。取第三代生长良好的细胞,流式细胞学(FCM)检测hDMSCs的CD分子,向成脂、成软骨和成骨细胞诱导分化,鉴定真皮间充质干细胞。免疫细胞化学检测角蛋白19(CK19)和波形蛋白(vimentin)鉴定间质细胞。取第三代生长良好的贴壁hDMSCs和不同时期瘢痕成纤维细胞通过非接触式transwell共培养体系培养21天,实时荧光-多聚合酶链反应(Real Time-PCR,PT-PCR)和蛋白电泳(Western-blot, WB)技术检测成纤维细胞中α-平滑肌动蛋白(a-SMA)和核心蛋白多糖(decorin, DCN))的mRNA表达和蛋白含量的变化,对照组分别用相对应瘢痕成纤维细胞不经任何处理普通六孔板培养21天。结果hDMSCs高表达CD73,CD105,CD44,CD90等间充质干细胞表面标志,不表达CD14,CD34,CD45等造血干细胞表面标志,经诱导可以向成脂、成软骨和成骨细胞分化。hDMSCs、成纤维细胞不表达CK19,阳性表达vimentin。与对照组相比,经与5×104hDMSCs共培养处理后的成纤维细胞中a-SMA mRNA及蛋白表达降低,DCN mRNA及蛋白表达增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论hDMSCs在体外培养体系中可抑制a-SMA mRNA和蛋白的表达、促进DCN mRNA和蛋白的表达,尤其以早期成纤维细胞受影响变化明显;hDMSCs有望用于早期病理性瘢痕的防治。
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