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目的制备抗赭曲霉毒素A(ochratoxin A, OA)的单克隆抗体(monoclonal antibody, McAb)并对其进行初步鉴定,在此基础上建立竞争抑制酶联免疫吸附试验(competitive inhibition enzyme linked immunosorbent assay, ci-ELISA)用于OA的检测。优化小米和玉米中OA的提取方法,应用建立的ci-ELISA检测济南市五个区的集市和超市出售的小米和玉米样品中OA的含量,初步了解污染情况。方法采用小剂量长周期的免疫方案,OA-牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)偶联物免疫雌性BALB/c小鼠,分别以OA-BSA. BSA为包被抗原,用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测小鼠血清中抗体的效价,观察该McAb与BSA的交叉反应情况。采用细胞融合的方法,以OA-BSA作为包被抗原,同时以BSA作对照,用ELISA法检测杂交瘤细胞培养上清中的McAb,获得分泌抗OA的McAb的杂交瘤细胞株,研究该McAb与BSA的交叉反应情况,以评价McAb的特异性。以有限稀释法对特异性分泌抗OA McAb的杂交瘤细胞进行克隆化,以ci-ELISA法进一步确定McAb的特异性,腹水诱生法大量制备McAb,采用辛酸-饱和硫酸铵法纯化腹水中的McAb,以ELISA检测纯化前和纯化后腹水效价,同时以BSA作包被抗原对照,研究交叉反应情况,以OA为竞争抗原,建立ci-ELISA方法用于OA的检测。选用不同浓度甲醇和氯化钠的溶液作提取溶剂提取样品中的OA,比较不同提取溶剂的加标回收率,观察提取溶剂中甲醇和氯化钠的浓度对小米、玉米样品中OA提取效果的影响,优化OA提取方法。采集济南市市中、历下、槐荫、天桥、历城五个区的集市出售的小米和玉米、济南市区超市出售的小米和玉米各50份,用所建立的ci-ELISA,采用标准加入法,对这些小米、玉米样品中OA含量进行了检测,计算检出率,并依照《中国国家标准GB2715—2005(粮食卫生标准)》中对谷类、豆类的OA的限量要求,计算超标率。所有数据均经SPSS软件包处理。结果OA-BSA免疫的BALB/c小鼠血清抗体效价为1：512000,与BSA有强烈的交叉反应。细胞融合后,ELISA筛选抗体分泌阳性的杂交瘤细胞株,抗OA-BSA的McAb与BSA的交叉反应率仅为3.50%,对分泌抗OA-BAS特异的McAb的细胞株经3轮克隆化,抗体分泌阳性率达到100%,建立了1株能稳定分泌抗OA-BSAMcAb的杂交瘤细胞株,ci-ELISA进一步证明了该抗体是特异针对OA的。腹水诱生法制备了大量的McAb,纯化后腹水抗体效价为1：512000,而且与BSA无交叉反应。ci-ELISA线性范围为0.04ng／ml-1250.OOng／ml,标准曲线的线性方程y=-0.1368x+0.6796,相关系数r=0.9965,检测下限为0.04ng／ml。当提取溶剂中甲醇含量为60%且含有5%氯化钠时对OA的提取效果较为理想,OA加标量为50.OOng／g、25.OOng／g、12.50ng／g时,以该提取溶剂进行确证实验,小米各加标量的平均回收率(%)分别为93.52%、96.86%、95.66%；变异系数(CV%)分别为4.59%、8.42%、8.94%,平均7.32%；玉米各加标量的平均回收率分别为96.30%、98.67%、98.13%,变异系数(CV%)分别为5.74%、5.59%、9.56%,平均6.96%。用于检测小米中OA的ci-ELISA工作曲线线性方程为y=-0.3249x+1.079,相关系数r=0.9959,用于检测玉米中OA的ci-ELISA工作曲线线性方程为y=-0.2554x+0.9561,相关系数r=0.9971。小米、玉米OA检测下限均为0.04ng／ml,OA最低限出量均为0.2ng／g。采集的所有样品中,小米OA检出率为41%(41／100),玉米OA的检出率为38%(38／100),二者无显著性差异(P>0.05),其中,集市小米OA的检出率为26%(13／50),集市玉米OA检出率为32%(16／50),二者无显著性差异(P>0.05)；超市小米OA检出率为56%(28／50),超市玉米OA检出率为44%(22／50),二者无显著性差异(P>0.05)；检测的所有小米样品中,超市小米OA检出率(56%)明显高于集市小米(26%)(P<0.05)；检测的所有玉米样品中,超市玉米(44%)和集市玉米(32%)OA检出率无显著性差异(P>0.05)。采集的所有样品中,小米(0.40-4.45ug/kg,中位数为1.73 ug/kg)和玉米(0.48-4.02ug/kg,中位数为1.61 ug/kg) OA含量无显著性差异(P>0.05)。其中,集市小米(0.41-3.94ug／kg,中位数为1.63 ug／kg)和集市玉米(0.53-3.99ug/kg,中位数为1.52 ug/kg)、超市小米(0.40-4.45ug/kg,中位数为1.78ug/kg)和超市玉米(0.48-4.02ug/kg,中位数为1.74 ug/kg) OA含量均无显著性差异(P>0.05)。检测的所有小米样品中,超市小米(中位数为1.78ug/kg)与集市小米(中位数为1.63ug/kg)OA含量无显著性差异(P>0.05),检测的所有玉米样品中超市玉米(中位数为1.74ug/kg)和集市玉米(中位数为1.52ug/kg) OA含量均无显著性差异(P>0.05)。本研究检测的所有样品的OA含量在0.40-4.45ug/kg之间,中位数为1.67ug/kg,根据《中国国家标准GB2715—2005(粮食卫生标准)》中对谷类、豆类的OA的限量≤5ug／kg的要求,所有样品中的OA含量均未超标。结论获得了分泌抗OA的McAb的杂交瘤细胞株。半抗原单抗的制备过程中,免疫抗原和检测抗原可以用同一种载体,从而使完全抗原的制备大大简化。在此抗OA-McAb基础上,建立了ci-ELISA方法,用于OA检测。该检测方法灵敏度较高,满足了《中国国家标准GB2715—2005(粮食卫生标准)》中对谷类、豆类的OA的限量≤5ug/kg的要求。以含有5%氯化钠的60%甲醇水溶液对小米、玉米中的OA的提取效果较为理想,方法重复性良好。济南市集市和超市出售的小米和玉米中均不同程度地存在OA污染情况；其中,超市小米的OA检出率高于集市小米OA的检出率。依照《中国国家标准GB2715—2005(粮食卫生标准)》中对谷类、豆类的OA的限量≤5ug／kg要求,所检测的样品中OA含量均未超标,中位数为1.67ug/kg。