功能性电刺激对脑梗死大鼠偏瘫肢体运动功能恢复的影响及对内源性神经干细胞行为的分子机制研究

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背景:脑卒中(stroke)又称脑血管意外,是一组由不同病因引起的急性脑血管循环障碍性疾病的总称。脑血管疾病可分为缺血性卒中和出血性卒中。脑卒中是神经系统的常见病及多发病,是一个重大的公共卫生问题,已成为威胁人类健康的三大疾病之一。城市居民脑血管病死亡已上升至第一、二位,农村地区在20世纪90年代初脑血管病死亡列第三位,90年代后期升至第二位。脑血管病是致残率很高的疾病。据统计,在存活的脑血管病患者中,约有四分之三不同程度地丧失劳动能力,其中重度致残者约占40%,其中偏瘫是脑卒中患者最常见的后遗症,急性期患者的发生率为80%,严重影响了患者的日常生活活动能力,给家庭和社会带来沉重的负担。   功能性电刺激(functional electrical stimulation,FES)是神经肌肉电刺激的一种,作为脑卒中后遗症的康复治疗手段,日益受到康复医学领域的关注。长期大量国内、外临床研究证明,电刺激治疗(结合其他康复治疗)能显著改善脑卒中患者的运动功能,提高患者的生活自理能力,明显降低致残率,其在改善脑卒中偏瘫患者运动功能方面具有重要作用。国内、外医生对FES应用于脑卒中偏瘫患者的报道逐步增多,也对其治疗效果比较满意,但由于缺少对其基础理论机制,在推广应用过程中还具有一定的盲目性,因此积极开展FES的作用机制研究,为临床更好地应用FES奠定重要的理论基础。   目的:评定FES对脑梗死大鼠偏瘫肢体运动功能恢复的效果;观察应用FES对脑梗死偏瘫大鼠梗死灶周围皮质及SVZ区内源性神经干细胞的影响;从而证明FES能够调控脑内源性NSC的行为,为临床更好地应用FES奠定重要的理论基础。   方法:360只成年雄性SD大鼠,分为FES组、安慰刺激组、对照组,120只/组,每组动物再分为治疗1d、3d、7d和14d组共4个亚组(30只/亚组)。造模术后3天开始进行FES治疗(15min/d)。安慰刺激组(治疗亚组)应用相同的FES仪治疗1d、3d、7d和14d,但不予以电流刺激;对照组未给予任何治疗。分别在治疗前和治疗后各时间点给予改良神经功能损害评分(The ModifiedNeurological Severity Score,mNSS)(包括运动实验、感觉实验、平衡木实验及反射丧失和不正常运动)评定;以免疫组化技术染色观察梗死灶周围皮质巢蛋白(nestin)变化;以免疫荧光技术观察梗死侧及健侧SVZ区内源性神经干细胞行为的变化。   结果:   1.改良神经功能损害评定所有造模成功的大鼠在FES治疗前与对照组比较,FES组和安慰刺激组均有中等程度的神经功能损害,而且三组之间没有统计学差异(P>0.05)。随着治疗天数的延长,三组的大鼠都有一定程度的神经功能的恢复,在治疗1d和3d后,三组的mNSS没有统计学差异,但在FES治疗7d及14d后,FES组的mNSS评分明显低于安慰刺激组与对照组,并且安慰刺激组与对照组之间的mNSS评分无统计学差异。大鼠mNSS评分中的运动项目评分在治疗1d和3d后,三组无统计学差异,但在FES治疗7天及14天后,FES组的运动项目评分明显低于其余两组(p<0.05),并且安慰刺激组与对照组之间的运动项目评分无统计学差异(p>0.05)。   2.对内源性神经干细胞行为的影响   (1)三组治疗1d后脑梗死大鼠梗死灶周围顶叶皮质nestin+细胞数开始增加,治疗3d、7d、14d后FES刺激组脑梗死大鼠梗死侧周围顶叶皮质nestin+细胞数比安慰刺激组和对照组显著性地增加(p<0.05),但安慰刺激组和对照组之间在各个观察时间点上脑梗死侧周围顶叶皮质nestin+细胞数无统计学差异(p>0.05)。   (2)梗死侧SVZ区FES组与其他两组比较在3d、7d和14d时,FES组的BrdU+细胞数明显多于安慰刺激组与对照组(p<0.05),并且FES组的BrdU+/GFAP+细胞数比安慰刺激组和对照组增多,只有3d时与其它两组有明显地统计学差异(p<0.05),但BrdU+/GFAP+细胞占BrdU+细胞数的比例而言,在7d和14d时FES组比安慰刺激组与对照组有明显地统计学差异(p<0.05)。   (3)健侧SVZ区FES组与其他两组比较在治疗1d、3d、7d和14d时,三组的BrdU+细胞数、BrdU+/GFAP+细胞数、BrdU+/GFAP+细胞占BrdU+细胞数的比例无统计学差异(p>0.05)。但是经过2周的治疗时间内,在键侧视管膜区可以看到BrdU+/GFAP+细胞相对多于安慰刺激组与对照组。   结论:   1.FES治疗可促进脑梗死偏瘫大鼠肢体运动功能恢复。   大鼠脑梗死后三天开始应用FES治疗偏瘫肢体治疗7d和14d时,可显著改善大鼠运动功能;但是FES在治疗1d、3d未见运动功能的改善。   2.FES治疗可促进内源性神经干细胞增值、分化,并促进缺血脑损伤的恢复的作用。   应用FES治疗,脑梗死大鼠梗死灶周围皮质nestin+细胞数在FES治疗3d时明显增加,然后逐渐减少,到了14d时仍大于安慰刺激组与对照组。   3.FES治疗可以激活SVZ区星形胶质细胞等内源性神经干细胞的活性,并促进成神经细胞的迁移,从而改善了偏瘫大鼠肢体运动功能。   应用FES治疗脑梗死大鼠偏瘫肢体3d、7d和14d,可增加梗死侧SVZ区BrdU+细胞数。治疗3d,可增加SVZ区BrdU+/GFAP+细胞数,而治疗7d、14d,SVZ区BrdU+/GFAP+细胞占BrdU+细胞数的比例显著性地增多。   4.FES治疗未能显著性地引起健侧大脑SVZ区的内源性神经干细胞的增值、分化。   应用FES治疗脑梗死大鼠偏瘫肢体14d后,在健侧大脑SVZ区BrdU+/GFAP+细胞、BrdU+细胞及BrdU+/GFAP+细胞占BrdU+细胞数的比例没有显著性地变化,对此尚需进一步的研究。
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