电融合法构建辅酶Q10高产菌株及发酵条件优化

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:pc84119
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
辅酶Q10别名泛醌,是一种脂溶性醌类化合物。辅酶Q10是生物体内呼吸链中的重要氢递体,具有抗氧化功能,可预防和治疗多种疾病。本试验选用辅酶Q10产生菌类球红细菌和豌豆根瘤菌作为出发菌株,采用原生质体电融合方法来获得辅酶Q10高产菌株,并且研究了其发酵条件,主要取得了以下的研究结果:(1)以类球红细菌和豌豆根瘤菌为出发菌株,从菌龄、高渗物质、溶菌酶浓度、酶解时间、酶解温度等方面分别对两株菌进行了原生质体制备与再生条件的研究。得出类球红细菌原生质体制备与再生条件是:菌龄48h、高渗物质为0.8mol/L NaCl、酶解时间90min、酶解温度32℃、溶菌酶浓度0.02mg/mL;豌豆根瘤菌原生质体制备与再生条件是:菌龄8h、高渗物质为0.6mol/LD-甘露醇、酶解时间80min、酶解温度30℃、溶菌酶浓度0.15mg/L。原生质体灭活试验结果:类球红细菌在60℃热灭活16min,豌豆根瘤菌紫外线灭活7min后达到100%灭火率。(2)采用原生质体电融合法,在单因素试验基础上,用响应曲面法优化电融合参数。以融合率为指标,研究了脉冲场强、脉冲个数、脉冲时间和脉冲间隔等参数对辅酶Q10产生菌电融合效果的影响。结果表明最优电融合参数为:脉冲强度2527V/cm,脉冲个数5个,脉冲时间55μs,脉冲间隔1.5s,在此条件下,融合率可达36.89%。(3)通过融合子初筛和复筛得出辅酶Q10产量和生物量都较高的最佳融合子为R-SL15,利用电镜观察融合子R-SL15的形态,采用考马斯亮蓝法鉴定融合子R-SL15,最后通过遗传稳定性试验最终确定融合子R-SL15能够稳定遗传。(4)以辅酶Q10产生菌R-SL15为试验出发菌株,在单因素基础上采用Plackett-Burman试验设计和Box-Behnken响应面分析方法对R-SL15的培养基进行优化模型建立。得出最优发酵培养基为:葡萄糖18.90g/L,酵母粉5.54g/L,蛋白胨5g、牛肉膏 3g,(NH4)2SO4 0.98g/L,KH2PO4 0.95 g/L,MgSO4·7H2O 0.5g/L,FeSO4·7H2O 50mg/L,ZnSO4·7H2O 10mg/L,NaCl 5g/L、蒸馏水 1L、PH7.0。辅酶Q10产量为 51.31mg/L,比优化前的25.74 mg/L提高了 99.34%。(5)利用单因素试验考察了接种量、摇瓶装液量、发酵培养基初始pH值、发酵时间、摇床转速及发酵温度对辅酶Q10发酵的影响。通过正交试验得出最优摇床发酵条件为:装液量50mL、pH值7、温度28℃、发酵时间28h。在此条件下,辅酶Q10产量为58.46 mg/L,比优化前的 51.31 mg/L 提高了 13.93%。
其他文献
就我国法律制度而言,船舶融资租赁承租人破产时,处于履行过程中的船舶融资租赁合同属于双方均未履行完毕的合同,需要受到破产管理人挑拣履行权的约束。如果管理人选择继续履行船舶融资租赁合同,出租人可以向管理人进行剩余全部租金的债权申报,即主张租金请求权;如果管理人选择解除船舶融资租赁合同,出租人可以取回租赁物,即行使破产取回权。本文围绕船舶融资租赁承租人破产时,出租人租金请求权的法律保护与破产取回权的法律
学位
Cu2+是动植物必须的微量元素,在新陈代谢调节方面发挥着重要作用。但超过一定浓度后Cu2+会引起脑神经中毒和肝脏损伤,急性铜中毒可能导致休克、肾功能衰竭和尿毒症等病变。所以,开发一种可靠的、专一的、灵敏度高的检测和监测活细胞、组织样品和周围环境中的铜离子含量的方法十分必要。而在众多的检测技术中,荧光检测技术因其操作简单且检测限低等优点而最为方便。菲并咪唑基团由可以增强荧光的生色团菲单元和非线性光学
学位
国内现有的涉农贷款风险管理方法比较落后,很大程度上局限于传统的方法,如简单的财务比率和客户经营情况分析,甚至有的授信方式很大程度上依赖于客户经理对承贷主体的个体了解程度。近年来金融行业竞争日趋激烈,依靠客户经理经验投放大规模的涉农贷款明显是无法满足投放需求的,同时简单的定性分析已经不符合现代经济形势下银行信贷风险管理的要求。延安市NY银行线上涉农贷款在投放中主要依靠涉农贷款模型评估客户资产信用状况
学位
悲悯情怀向来都是一笔非常宝贵的精神财富。于文学创作而言,它体现着作家对世间博大的爱,彰显着作品的内涵和价值,散发着文学作品的独特魅力。涅斯梅洛夫是最优秀的哈尔滨俄侨诗人之一,痛苦的人生经历使他拥有了一种悲天悯人的博大情怀。巴赫金对话理论内涵丰富,对很多领域的问题都有较好的解释力。运用巴赫金对话理论研究涅斯梅洛夫的精神世界能使人们更加深刻地了解涅斯梅洛夫及其作品,同时这也为中国俄罗斯侨民文学研究提供
学位
中国是作为四大文明古国之一,蕴含着大量历史和文化的积累。近年来,21世纪“海上丝绸之路”的提出,海外贸易的相关文献外译越来越得到重视。本翻译实践报告基于明清史学术作品《明代海外贸易研究》部分章节的英译实践,以翻译补偿理论为支撑,以特色词汇英译作为切入点,探讨了语义补偿策略在特色词汇英译中的运用。报告取材于《明代海外贸易研究》前三章的部分内容。在对文本进行审校时发现由于文化背景差异和认知理解偏差等问
学位
网络技术的飞速发展,把现实活动与网络世界紧密联系在一起,疫情背景下,网络已经成为人类生存不可缺少的部分,日常生活与经营都与其息息相关。网络在提供便利的同时,也带来网络侵权的困扰,其中最显著的是侵犯网络隐私权问题。侵犯网络隐私权的行为具有专业化、复杂化、性质边界化的特点,很多侵权行为如网络暴力、强制安装流氓软件等在现有法律体系中很难得到有效的制止,但网络隐私侵权往往产生巨大的损害后果且无有效补救措施
学位
海底管道机器人进行清洗、检测、封堵等管内作业时,外界通常需要确定管道机器人在管内的具体位置,并与管道机器人之间建立通信。目前管道机器人的极低频发射系统均采用螺线管发射线圈。其存在体积大,易发热,功率大和效率低等弊端。因此,本文选择机械天线作为管道机器人的极低频信号发射装置。本文首先研究了机械天线发射系统,分析机械天线的工作机理,对旋转永磁体进行了有限元仿真。其次分析了金属管道对磁信号的衰减作用,通
学位
【目的】从理论的角度探讨细胞自噬与肥胖炎症状态之间的内在机制,阐明肥胖发生的关键病机,探索细胞自噬与痰湿困脾的关联,对调控细胞自噬作用于肥胖痰湿证炎症状态的可能机制进行探讨;并通过实验研究观察温胆汤对高脂饮食诱导的肥胖痰湿证大鼠肾周脂肪组织的炎症细胞因子和自噬活性标志物表达的影响,探讨温胆汤干预肥胖痰湿证炎症状态与细胞自噬的内在关联,借以从细胞自噬的角度来阐明温胆汤干预肥胖痰湿证的科学内涵。【方法
学位
激光雷达与惯性测量单元(Inertial Measurement Unit,IMU)是智能无人系统经常配备的两种传感器。激光雷达可提供高精度的测距信息,但其较低的数据输出频率无法满足载体快速运动状态下可靠定位的需求。IMU虽能够以较高频率输出线加速度与角速度测量值并据此持续估计载体位姿,但其作为内部传感器只能对短时间内的位姿进行准确估计。为了实现激光雷达和IMU的高效融合与优势互补,本文提出了一种
学位
本研究基于自建的中、美英语语言学硕士论文库,从频率特征,搭配和类连接这几个方面,对中、美英语语言学硕士在其硕士毕业论文中对否定词的使用特征进行对比研究,以发现中国英语语言学硕士对否定词使用的不足之处,并解释导致这种情况的原因。因为英语中否定词的复杂性,本研究基于标记理论对否定词进行了分类,将否定词分为标记否定词和非标记否定词,非标记否定词又再分为非标记非词缀否定词和非标记词缀否定词,使研究更清晰明
学位