【摘 要】
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目的:乳腺癌居于中国女性恶性肿瘤发病率及死亡率之首的疾病,而三阴性乳腺癌（Triple negative breast cancer,TNBC）作为一种特殊的乳腺癌,具有更高的侵袭性、转移率以及更差的预后,其放化疗效果较差,临床尚缺乏有效的治疗药物。本研究培养人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468,探讨苦豆碱（Aloperine,Alo）对人三阴性乳腺癌细胞上皮间质转化（Ep
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目的:乳腺癌居于中国女性恶性肿瘤发病率及死亡率之首的疾病,而三阴性乳腺癌（Triple negative breast cancer,TNBC）作为一种特殊的乳腺癌,具有更高的侵袭性、转移率以及更差的预后,其放化疗效果较差,临床尚缺乏有效的治疗药物。本研究培养人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468,探讨苦豆碱（Aloperine,Alo）对人三阴性乳腺癌细胞上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）和细胞周期的影响。方法:1.培养人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468,CCK-8实验中加入不同浓度（25,50,100,200,400,800μM）Alo干预,检测人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468的细胞活力,筛选合适的Alo浓度进入后续实验。细胞划痕实验检测Alo对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468迁移能力的影响;Transwell迁移和侵袭实验检测Alo对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468的迁移和侵袭能力的影响;Real-time q PCR法检测人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468中转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）及EMT相关标志物如:上皮细胞钙粘蛋白（E-cadherin）、胞质紧密粘连蛋白1（zonula occludens-1,ZO-1）、波形蛋白（Vimentin）、间质细胞钙粘蛋白（N-cadherin）和Snail的m RNA水平;免疫细胞化学法观察人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468中E-cadherin的蛋白表达;Western Blot法检测人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468内TGF-β1及EMT相关标志物（ZO-1、Vimentin、N-cadherin及Snail）的蛋白表达。2.培养人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468,并加入50、100、200μM Alo干预,Ed U实验检测Alo对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468增殖的影响;流式细胞术检测Alo对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468的细胞周期分布的影响;Western Blot法检测人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468内PI3K/AKT的通路相关蛋白:p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT的表达;Western Blot法检测人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468内细胞周期相关蛋白（Cyclin B1、CDK1和P21）的表达。结果:1.以MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞为研究对象,CCK-8实验结果表明25、50、100、200、400和800μM Alo均可显著抑制人三阴性乳腺癌细胞的细胞活力,我们选取50、100、200μM Alo用于后续实验;细胞划痕实验和Transwell迁移实验结果均表明Alo可显著抑制人三阴性乳腺癌细胞的迁移能力;Transwell侵袭实验结果表明Alo可显著抑制人三阴性乳腺癌细胞的侵袭能力;Real-time q PCR结果表明Alo可上调人三阴性乳腺癌细胞中E-cadherin和ZO-1的m RNA水平,下调TGF-β1、Vimentin、N-cadherin和Snail的m RNA水平;Western Blot结果表明Alo可上调人三阴性乳腺癌细胞中E-cadherin和ZO-1的蛋白表达,下调TGF-β1、Vimentin、N-cadherin和Snail的蛋白表达;免疫细胞化学结果表明Alo可上调人三阴性乳腺癌细胞E-cadherin的蛋白表达。2.以MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞为研究对象,Ed U实验结果表明各浓度的Alo可显著抑制人三阴性乳腺癌细胞的增殖;流式细胞术结果表明Alo可诱导人三阴性乳腺癌细胞阻滞于G2/M期;Western Blot结果表明Alo可上调人三阴性乳腺癌细胞P21的蛋白表达,下调Cyclin B1、CDK1的蛋白表达以及p-PI3K和p-AKT的蛋白水平。结论:Alo可逆转人三阴性乳腺癌细胞EMT进而抑制其迁移及侵袭;Alo可将人三阴性乳腺癌细胞阻滞在G2/M期,下调PI3K/AKT信号通路。
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