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第一部分:溶血卵磷脂酰基转移酶1缺陷对小鼠视网膜组织和视网膜电图的影响 目的：观察溶血卵磷脂酰基转移酶1缺陷(LPCAT1)小鼠视网膜组织结构和视网膜电图（F-ERG）在变性过程中的变化。 方法：Lpcat1基因自发突变纯合子的rd11小鼠作为实验组，选取出生后14、28、42和56d的小鼠共60只;同龄野生型C57BL/6J小鼠（60只）作为对照。上述4个年龄段的两组小鼠，行视网膜石蜡切片HE染色观察视网膜显微结构;行F-ERG检测，记录暗视杆体反应和明视锥体反应。运用视网膜铺片免疫荧光染色法，观察两组小鼠视锥细胞M-和S-视蛋白的表达分布及变化。 结果：光学显微镜观察发现:实验组小鼠视网膜组织结构随鼠龄增长光感受器细胞层逐渐减少，而对照组视网膜组织结构基本正常。F-ERG实验结果显示:实验组小鼠出生后14、28 d暗视杆体反应存在，呈下降趋势，出生后42和56 d，暗视杆体反应消失，对照组各时间点暗视杆体反应正常;出生后14d，实验组和对照组小鼠b波振幅分别为(72.8±15.6)、（105.2±21.1）μV，实验组较对照组降低，差异有统计学意义(t=-2.760，P＜0.05);出生后28 d时，实验组和对照组小鼠b波幅值分别为（20.6±6.4）、（231.8±32.0）μV，实验组较对照组明显降低，差异有统计学意义（t=-14.471，P＜0.05）。实验组小鼠出生后14、28和42 d明视锥体反应存在，呈降低趋势，出生后56 d明视锥体反应消失，对照组各时间点明视锥体反应正常;出生后14d，实验组和对照组小鼠b波振幅分别为（46.8±7.2）、（42.8±6.4）μV，两组相比，差异无统计学意义;出生后28和42 d，实验组小鼠b波振幅分别为（78.0±8.2）、（17.2±2.0）μV，对照组小鼠b波振幅分别为（91.4±9.4）、（116.2±12.9）μV，实验组较对照组明显降低，差异有统计学意义（t=-2.401、-17.008，P均＜0.05）。视网膜铺片免疫荧光染色结果显示:实验组小鼠视网膜锥细胞M-和S-视蛋白表达密度随鼠龄增长逐渐下降，到出生后42 d，实验组小鼠视网膜大部分区域M-视蛋白和S-视蛋白表达消失，而对照组未见明显变化。出生后28 d，实验组小鼠视网膜后极部颞上、颞下、鼻上、鼻下区域M-视蛋白的表达密度分别为(414±32)、(300±8)、（324±22）和（250±20）个/0.037mm2，与同龄对照组（484±21）、（442±19）、（459±34）和（436±12）个/0.037 mm2相比，差异均有统计学意义（t=4.114、15.225、7.505、17.990， P均＜0.05）;上述4个区域S-视蛋白的表达密度下降更明显，分别为（8±4）、（175±16）、（74±13）、（315±20）个/0.037 mm2，明显低于对照组（73±16）、（436±30）、（393±30）和（480±19）个/0.037 mm2，差异均有统计学意义（t=8.555、17.076、21.637、13.498，P均＜0.05）。 结论： LPCAT1缺陷主要影响小鼠视网膜外层光感受器细胞，视杆系统功能下降早于视锥系统，锥细胞S-视蛋白的消失早于M-视蛋白。 第二部分:腺相关病毒载体介导Lpcat1基因治疗rd11小鼠视网膜变性的研究 目的：rd11小鼠是近年来新发现的视网膜变性动物模型(Lpcat1基因自发突变纯合子)，目前对其的治疗研究并未有见报道。为了验证这种视网膜变性基因治疗的可行性，我们以酪氨酸突变的腺相关病毒(AAV)作为转基因载体，观察其能否挽救视网膜结构及功能。 方法：将AAV8(Y733F)-smCBA-Lpcat1注射至60只出生后14 d的rd11小鼠一只眼视网膜下腔，对侧眼不注射作为阴性对照。分别检测治疗后4、7和10周rd11小鼠视网膜电图(F-ERG)，并通过水迷宫实验检测视行为。最后对小鼠眼球进行HE染色、免疫荧光染色、视网膜铺片，观察视网膜结构及LPCAT1蛋白和锥细胞视蛋白的表达情况。实验中均选择同龄野生型C57BL/6J小鼠作为阳性对照。 结果：AAV8(Y733F)介导Lpcat1基因的表达可以有效恢复视网膜结构和功能，疗效可维持10周以上。治疗后10周，rd11小鼠治疗眼F-ERG最大混合反应、暗视杆体反应和明视锥体反应b波振幅分别为（417.3±63.8）、（208.3±31.5）和（68.7±8.5）μV，与未治疗眼(14.9±10.9μV、5.4±4.6μV和6.0±6.5μV)和同龄野生型C57BL/6J小鼠(659.7±47.2μV、314.0±44.1μV和109.0±7.5μV)相比差异均有统计学意义（P均＜0.05）。而反映视锥、视杆细胞敏感度的b波峰时，治疗眼与同龄野生型C57BL/6J小鼠间无明显差异;HE染色结果显示rd11小鼠治疗眼视网膜外核层厚度达6～7层，较未治疗眼明显变厚;免疫荧光染色可检测到治疗眼视网膜中LPCAT1蛋白阳性表达，锥细胞M-和S-视蛋白的表达恢复，而未治疗眼均呈阴性表达;水迷宫实验显示rd11小鼠治疗眼和对侧未治疗眼的暗室平均逃生时间分别为（15.4±3.4）和（41.8±6.4）s，差异有统计学意义（P＜0.05），治疗鼠与同龄野生型C57BL/6J小鼠相比，差异无统计学意义。 结论：AAV8(Y733F)载体介导的Lpcat1基因表达，可以有效挽救rd11小鼠快速的视网膜变性。